调控Runx2的重力敏感miRNA的筛选研究

• 作者: 张丽君 张舒 曹新生 李高志 王可 王艺璇 石菲 胡泽兵
• 来源期刊: 解放军医学院学报
• 学科: 医学
• 关键词: miRNA miR-135a-5p Runx2 模拟失重 MC3T3-E1细胞
• 年，卷（期）: 2020,（10）
• 所属期刊栏目: 基础研究论著
• 页码范围: 1023-1028,1036
• 页数: 7页
• 分类号: R852.22
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-5227.2020.10.015

摘要

目的 在预测可能调控Runx2表达的miRNA中,筛选出具有重力敏感性的miRNA,为失重性骨丢失的在体靶向干预提供研究靶点.方法 通过生物信息学分析方法预测出与Runx2结合的4条miRNA;利用2D回转器对前成骨细胞MC3T3-E1进行模拟失重处理;向MC3T3-E1细胞中转染miR-135a-5p mimic或inhibitor;采用qRT-PCR方法检测miRNA及Runx2 mRNA的表达变化;采用Western blot方法检测Runx2蛋白的表达变化.结果 生物信息学预测miR-135a-5p、miR-137-3p、miR-205-5p和miR-217-5p可与Runx2结合,其中模拟失重条件下miR-135a-5p的表达可发生显著改变.与对照组相比,模拟失重48 h后miR-135a-5p的表达明显上调,且72 h内呈现稳定上调趋势(P<0.05);与对照组相比,模拟失重72 h内Runx2的mRNA和蛋白表达明显下调(P<0.05);转染miR-135a-5p mimic或inhibitor后,Runx2的mRNA表达无显著改变,Runx2的蛋白表达则分别显著下调或上调(P<0.01);转染miR-135a-5p inhibitor后可部分缓解模拟失重对Runx2蛋白表达的抑制作用(P<0.01),但对Runx2的mRNA表达水平无显著影响.结论 miR-135a-5p在模拟失重条件下表达升高,且与Runx2的表达呈负相关,miR-135a-5p可调控Runx2的蛋白表达,miR-135a-5p inhibitor可部分缓解模拟失重对Runx2蛋白表达的抑制作用.