新型猪α干扰素YNS突变体的构建及其抗病毒活性检测

• 作者: 王朋涛 梁秀丽 徐盟龙 赵福杰 闫晓光 魏战勇
• 来源期刊: 畜牧与兽医
• 关键词: 猪α干扰素 基因突变 抗病毒活性
• 年，卷（期）: 2020,（12）
• 所属期刊栏目: 预防兽医|PREVENTIVE VETERINARY MEDICINE
• 页码范围: 116-120
• 页数: 5页
• 分类号: S853
• 语种: 中文

摘要

试验旨在获得高活性的猪α干扰素(porcine interferon alpha,PoIFN-α).利用融合PCR方法将天然猪α干扰素基因进行定点突变,突变位点为58H(CAT)→Y(TAC)、59E(GAG)→N(AAC)及61L(CTC)→S(AGC).将突变基因克隆到pET-32a载体上,转化至大肠杆菌Rosetta中诱导表达和鉴定,利用MTT法检测猪α干扰素对Vero细胞的抗增殖能力,利用Vero/VSV系统上测定其抗病毒活性.结果显示,重组蛋白表达形式为包涵体,蛋白分子质量约33 kDa,纯化后猪α干扰素YNS突变体蛋白的CC50为462.7 μg/mL,其抗病毒活性为1.63×106IU/mg,相比天然干扰素蛋白活性提高.本研究成功构建了高效猪α干扰素YNS突变体,为干扰素的临床应用提供理论基础.