HPV16型L1蛋白优势表位原核表达及其血清学验证

• 作者: 侯江厚 刘艳华 孙卫国 孙雯娜 张灵霞 杨秉芬
• 来源期刊: 检验医学
• 学科: 医学
• 关键词: 人乳头瘤病毒16型L1蛋白 原核表达 免疫原性 血清学反应
• 年，卷（期）: 2020,（9）
• 所属期刊栏目: 基础研究?论著
• 页码范围: 928-932
• 页数: 5页
• 分类号: R446.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1673-8640.2020.09.017

摘要

目的 利用原核系统对人乳头瘤病毒(HPV)16型L1蛋白优势抗原表位进行重组表达与纯化,并检测血清学反应.方法 对HPV16型L1蛋白优势抗原表位进行全基因合成,将核酸片段克隆至pET-DsbC原核表达载体,重组质粒转化大肠埃希菌Rosetta(DE3),经异丙基-β-D-硫代半乳糖苷(IPTG)诱导表达,采用亲和层析对表达产物进行纯化,采用免疫印迹法、酶联免疫吸附试验(ELISA)验证重组蛋白的免疫学活性.结果 成功构建了pET-DsbC-HPV16 L1表达载体,并在大肠埃希菌Rosetta(DE3)中实现了稳定的可溶性表达.重组DsbC-HPV16 L1蛋白经亲和层析进行纯化,相对分子质量为45000,纯度为95％,重组蛋白纯化得率为22％.免疫印迹法结果显示,重组DsbC-HPV16 L1蛋白可与HPV16型阳性血清产生特异的抗原-抗体反应,与重组DsbC蛋白或健康人血清无交叉反应,具有良好的特异性.ELISA结果显示,重组DsbC-HPV16 L1蛋白与HPV16型阳性血清有较强的免疫反应性,A450 nm均值为0.56,高于健康人血清和磷酸盐缓冲液(PBS)阴性对照(A450 nm均值分别为0.24和0.21).结论 采用原核表达系统实现了HPV16型L1蛋白优势抗原表位的可溶性高表达,获得的重组蛋白具有良好的免疫原性和免疫学活性.