HPV16 E7蛋白编码基因原核表达与鉴定

• 作者: 张卫东 施桥发 曹康 李明远 李虹 王保宁 蒋忠华 魏晓丽
• 来源期刊: 四川大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: HPV16 原核表达 SDS-PAGE 免疫印迹
• 年，卷（期）: 2006,（2）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 187-190
• 页数: 4页
• 分类号: R737.31
• 字数: 3716字
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1672-173X.2006.02.006

摘要

目的研究HPV16 E7蛋白的生物学特性及其细胞转化机制,对HPV16 E7蛋白原核表达质粒进行构建、表达和鉴定.方法以临床确诊的HPV16感染患者子宫颈细胞DNA为模板,采用PCR方法扩增HPV16 E7基因,经BamHⅠ和HindⅢ双酶切后插入相同酶切pET32a(+)载体,转化JM109感受态细胞,并进行阳性克隆筛选.经IPTG对重组质粒进行蛋白诱导表达,SDS-PAGE和Western blot检测目标蛋白表达情况.结果成功构建了原核表达质粒pET32/E7, HPV16 E7-TRX融合蛋白在BL21(DE3)菌株中高效表达,在1 mmol/L IPTG、30 ℃诱导条件下融合蛋白表达量占菌体总蛋白的30%左右.结论 pET32/E7原核表达质粒的构建、HPV16 E7融合蛋白的表达为进一步深入研究HPV16E7蛋白的生物学特性及其致细胞转化的作用机制奠定了基础.