1株乳源蜡样芽胞杆菌的分离鉴定及致病性分析

• 作者: 廖启超 张云珍 易华山 朱飘 梁望旺 王艳 谢远兵 赵瑶 邓艳红 郑凯 陈忠琼 马鲜平
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 蜡样芽胞杆菌 16S rRNA 耐药性 多位点序列分型
• 年，卷（期）: 2020,（8）
• 所属期刊栏目: 人兽共患病
• 页码范围: 1491-1500
• 页数: 10页
• 分类号: S852.61|R535
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.08.11

摘要

无菌采集重庆市某奶牛场乳房炎患牛奶样,利用MYP选择培养基无菌分离培养得到1株疑似蜡样芽孢杆菌的纯培养物,利用全自动微生物鉴定系统、16S rRNA、KB法药敏试验、MLST分型和PCR扩增hblA、hblC、hblD、nheA、nheB、nheC、cytK、entFM、Ces毒力基因及测序,并通过测定小鼠LD50,血清ALT、AST、LDH和ALP活性,肝脏组织SOD、MDA、GSH-Px水平及病变组织病理组织学观察进行分析鉴定.结果 显示,分离株在甘露醇卵黄多黏菌素琼脂(MYP)平板上,形成周围有白色至淡粉红色的菌落,在蜡样芽孢杆菌显色培养基上形成具有白色光晕的蓝色菌落,革兰染色阳性.全自动微生物鉴定系统鉴定为蜡样芽孢杆菌,鉴定可信度为99.9％,典型度为132(典型).16S rRNA序列与与韩国(FJ982661.1)、美国(NZ_ JURK01000037.1)、斯里兰卡(MG827268.1)、马来西亚(MN093796.1)株同源性为100％,同美国奶源分离株(NZ_ASPZ01000016.1)亲缘关系最近.药敏试验结果表明,分离株对青霉素G、红霉素、苯唑西林、四环素、克拉霉素、环丙沙星、左氧氟沙星等极度敏感,对大观霉素、万古霉素、多黏菌素B耐药.该菌株MLST基因型为ST476,与ST1813亲缘关系最近,对扩增相关毒力基因PCR产物测序结果表明,nheA基因片段同日本分离炭疽杆菌(AP019731.1)毒力基因同源性高达96.91％,entFM基因片段同美国蜡样芽孢杆菌(CP001186.1)同源性为97.45％,nheB基因片段同挪威蜡样芽孢杆菌(CP001283.1)同源性高达95.48％.对小鼠的LD50为1.44×1010CFU.ALT、AST、LDH、ALP及MDA显著升高,SOD、GSH-Px含量明显降低.显微观察显示对照组小鼠肝小叶结构正常,攻毒组可见肝脏肿大、充血、质地脆弱、肝索排列紊乱,肝细胞变性坏死等肝损伤特征.本试验从奶牛乳房炎奶样中分离鉴定出1株耐多黏菌素、万古霉素及大观霉素的肠毒素基因型蜡样芽孢杆菌,命名为蜡样芽孢杆菌2018CQ-CMM01.该分离菌对小鼠LD50为1.44×1010CFU,对小鼠具有明显的肝脏毒性,目前暂未发现国内其他地区乳源中有该型蜡样芽孢杆菌报道.