单重PCR鉴别犬4种布鲁氏菌检测方法的建立

• 作者: 仉伟 徐怀英 盛晓丹 秦卓明 郝文娟 黄迪海
• 来源期刊: 中国动物检疫
• 学科: 农学
• 关键词: 布鲁氏菌 犬 单重PCR 实验室检测
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 技术支撑
• 页码范围: 82-86
• 页数: 5页
• 分类号: S855.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1005-944X.2020.11.016

摘要

为建立适合犬布鲁氏菌病临床检测的单重PCR方法,通过对比粗糙型(犬种)与光滑型(羊种、牛种和猪种)布鲁氏菌基因组DNA的序列差异,设计1对引物并优化反应条件,建立了可初步鉴别犬4种布鲁氏菌的PCR方法,然后对该方法的特异性和灵敏度进行评价,并对20份犬布鲁氏菌血清学阳性的血液样品进行临床检测.结果显示,利用建立的PCR反应体系对牛种、羊种和猪种布鲁氏菌均能扩增出717 bp的目的条带,对犬种布鲁氏菌能扩增出366 bp的目的条带;最低可检测到犬种、羊种、猪种和牛种布鲁氏菌基因组DNA浓度分别为5.07×10-2、6.20×10-2、7.80×10-3和5.50×10-2 ng/μL;20份血液样品中共检测到3份犬种布鲁氏菌阳性样品,与使用GB/T 18646—2018引物的PCR检测结果一致.结果表明,本试验建立的单重PCR方法简捷、特异、敏感,适合基层兽医实验室对犬布鲁氏菌病的检测与鉴定.