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耐草甘膦转EPSPS/GAT大豆多重PCR检测体系的建立及应用
耐草甘膦转EPSPS/GAT大豆多重PCR检测体系的建立及应用
作者:
文静
邱丽娟
郭勇
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
转基因大豆
抗除草剂
外源基因
侧翼序列
多重PCR
摘要:
[目的]建立一种精准、高效的草甘膦抗性基因G2-EPSPS和GAT的检测方法,为转基因大豆新品系ZH10-6的广泛应用提供技术支持.[方法]根据抗草甘膦大豆ZH10-6和受体中黄10的分子特征,设计大豆内源参考基因(Actin)、外源基因(G2-EPSPS和GAT)以及侧翼序列(G2EPSPS-2/ZH10P2和ZH10P1/GAT-2)的特异性引物,通过PCR扩增测试引物的特异性和适用性.调整引物配比、DNA模板量、dNTP含量、退火温度和延伸温度等,筛选该多重PCR体系的最适扩增条件.将转基因大豆ZH10-6和受体中黄1 0的基因组DNA按质量比混合,制备成100%、50%、10%、5%、1%、0.5%、0.1%和0的DNA样品,进行灵敏度检测.运用建立的多重PCR体系检测转基因大豆ZH10-6不同地理来源的11份衍生品系,并根据鉴定结果对该体系的应用性进行评价.[结果]建立的多重PCR方法中引物GmActin11 F/R、G2-EPSPS F/R、GAT F/R、ZH10P1/GAT和G2/ZH10P2可分别扩增出转基因大豆ZH10-6大小为126、4 30、338、81 0和1 626 bp的特异性目标条带.用该方法扩增受体中黄1 0时,除了GmActin11 F/R可以扩增出126 bp目标条带,侧翼序列上游引物ZH10P1和下游引物ZH10P2也可以扩增出632 bp目标条带.多重PCR最适扩增体系为DNA模板量100 ng、5U·μL-1 Ex Taq 0.2μL、10×ExTaq Buffer 2.5 μL、2.5 mmol·L-1 dNTP 2μL、10μmol·L-1引物(GmActinll F/R 0.4 μL、G2-EPSPS F/R 0.6μL、GAT F/R 0.4 μL、ZH10P1/GAT 0.6μL和G2/ZH10P2 0.6 μL),ddH2O补足25 μL.多重PCR扩增最适程序为95℃ 5 min;95℃ 30 s,60℃ 30 s,68℃ 1 min 20 s,35个循环;72℃ 12 min.该多重PCR体系灵敏度为0.5%,符合欧盟有关转基因产品标识的要求.该多重PCR方法特异性很强,可以成功检测受体中黄10、转基因大豆ZH10-6及ZH10-6不同地理来源的11个衍生品系.[结论]建立的转EPSPS/GAT大豆多重PCR检测体系具有高通量、特异性强、操作简便和应用广泛的优点,并且能够快速、准确地检测转基因大豆ZH10-6及其衍生品系.
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文献信息
篇名
耐草甘膦转EPSPS/GAT大豆多重PCR检测体系的建立及应用
来源期刊
中国农业科学
学科
关键词
转基因大豆
抗除草剂
外源基因
侧翼序列
多重PCR
年,卷(期)
2020,(20)
所属期刊栏目
作物遗传育种·种质资源·分子遗传学
研究方向
页码范围
4127-4136
页数
10页
分类号
字数
语种
中文
DOI
10.3864/j.issn.0578-1752.2020.20.003
五维指标
作者信息
序号
姓名
单位
发文数
被引次数
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G指数
1
邱丽娟
中国农业科学院作物科学研究所
84
1808
25.0
40.0
2
郭勇
中国农业科学院作物科学研究所
17
146
6.0
12.0
3
文静
中国农业科学院作物科学研究所
5
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4.0
5.0
传播情况
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抗除草剂
外源基因
侧翼序列
多重PCR
研究起点
研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
相关学者/机构
期刊影响力
中国农业科学
主办单位:
中国农业科学院
出版周期:
半月刊
ISSN:
0578-1752
CN:
11-1328/S
开本:
大16开
出版地:
北京中关村南大街12号
邮发代号:
2-138
创刊时间:
1960
语种:
chi
出版文献量(篇)
9193
总下载数(次)
12
总被引数(次)
254208
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