微小RNA16-5p靶向四分子交联体15基因通过磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路抑制骨肉瘤细胞的增殖、迁移和侵袭

• 作者: 常峰 张慧君 杨晓荣 蔚晋斌 贾中伟 闫力维
• 来源期刊: 中华医学杂志
• 关键词: 骨肉瘤 微小RNA-16-5p 四分子交联体15 磷脂酰肌醇3激酶/蛋白激酶B信号通路 增殖
• 年，卷（期）: 2020,（21）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 1668-1675
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112137-20191029-02340

摘要

目的 研究微小RNA-16-5p(miR-16-5p)对骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭的影响及其作用机制.方法 实时荧光定量聚合酶链反应(qPCR)和蛋白质印迹法(Western blotting法)检测人正常成骨细胞hFOB 1.19和骨肉瘤细胞MG63、Saos2、HOS内miR-16-5p、四分子交联体15 (TSPAN 15)mRNA和蛋白表达.在MG63细胞中转染miR-16-5p或si-TSPAN 15,观察其在细胞增殖、迁移和侵袭中的作用.噻唑蓝(MTT)检测细胞增殖,Transwell法检测细胞迁移和侵袭,Western blotting法检测细胞周期蛋白D1 (Cyclin D1)、基质金属蛋白酶2(MMP-2)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、TSPAN 15、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶(p-PI3K)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)蛋白表达.Starbase网站预测结合双荧光素酶基因报告实验分析miR-16-5p与TSPAN15的靶向关系.将miR-16-5p和pcDNA-TSPAN1共转染,评估高表达TSPAN15对过表达miR-16-5p诱导的MG63细胞增殖、迁移和侵袭的影响.两组间数据的比较采用t检验.结果 与hFOB 1.19细胞(1.00±0.12)相比,MG63、Saos2、HOS细胞中miR-16-5p表达量(分别为0.32±0.05、0.40±0.04、0.45±0.06)明显降低(F=156.204,P＜0.05),TSPAN15 mRNA和蛋白水平显著提高(F=71.718、110.350,均P＜0.05).过表达miR-16-5p明显减少MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白表达量及细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量(F=150.136、117.228、154.971、89.479、98.373、130.880,均P＜0.05).敲减TSPAN15明显降低MG63细胞中CyclinD1、MMP-2、MMP-9蛋白水平、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量(F=93.206、107.030、109.326、115.625、146.113、139.300,均P＜0.05).过表达miR-16-5p显著降低MG63细胞中p-PI3K、p-AKT蛋白表达量(F=156.755、181.419,均P＜0.05).miR-16-5p靶向调控TSPAN15的表达.高表达TSPAN 15可部分逆转miR-16-5p对MG63细胞内TSPAN15、CyclinD1、MMP-2、MMP-9、p-PI3K、p-AKT蛋白表达、细胞存活率、细胞迁移数量和侵袭数量的抑制作用.结论 miR-16-5p通过靶向TSPAN 15基因并调控PI3K/AKT信号通路,从而抑制骨肉瘤细胞增殖、迁移和侵袭.

作者信息

序号	姓名	单位	发文数	被引次数	H指数	G指数
1	常峰	山西省人民医院骨科	43	152	7.0	10.0
2	贾中伟	山西省人民医院骨科	22	84	5.0	8.0
3	蔚晋斌	山西省人民医院骨科	23	86	5.0	8.0
4	张慧君	山西卫生健康职业学院护理系外科教研室	1	0	0.0	0.0
5	闫力维	山西省忻州市人民医院骨科	1	0	0.0	0.0
6	杨晓荣	山西医科大学生理教研室	1	0	0.0	0.0