毒害艾美耳球虫纳米PCR检测方法的建立及初步应用

• 作者: 王一 王钰鑫 李媛 王俊伟 宋军科 赵光辉
• 来源期刊: 中国兽医学报
• 学科: 农学
• 关键词: 鸡 毒害艾美耳球虫 纳米PCR ITS-2 临床检测
• 年，卷（期）: 2020,（11）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 2139-2144
• 页数: 6页
• 分类号: S852.729
• 语种: 中文
• DOI: 10.16303/j.cnki.1005-4545.2020.11.10

摘要

毒害艾美耳球虫(Eimeria necatrix)是引起鸡急性小肠球虫病最重要的病原,为了对毒害艾美耳球虫进行快速特异性检测,本研究基于毒害艾美耳球虫ITS-2基因序列,通过退火温度、引物用量等反应条件的优化,建立了鸡毒害艾美耳球虫特异性纳米PCR检测方法.结果显示,该方法成功扩增出毒害艾美耳球虫约380 bp的特异性片段,其最低检出质量浓度为3.64 μg/L,敏感性是普通PCR的100倍;进一步对毒害艾美耳球虫、柔嫩艾美耳球虫、贝氏隐孢子虫等多种病原的DNA样品进行扩增,该方法仅能扩增出毒害艾美耳球虫的目的片段.利用所建立的纳米PCR检测方法对40份鸡的粪便样品进行检测,发现受检样品中毒害艾美耳球虫阳性率为35.0％(14/40),与普通PCR检测结果一致.结果表明,本研究建立的毒害艾美耳球虫纳米PCR检测方法能够实现对毒害艾美耳球虫的快速准确检测,且与普通PCR相比具有更高的敏感性和特异性,为毒害艾美耳球虫感染的临床鉴别诊断和防控提供了技术基础.