摘要:
目的 探索依托咪酯对脂多糖(LPS)诱导Kupffer细胞(KCs)炎症反应及核苷酸结合寡聚化结构域样受体蛋白3(NLRP3)/白细胞介素-1β(IL-1β)通路的影响.方法 用SD大鼠分离和培养KCs,井将细胞随机分为空白组、模型组、对照组和低、高浓度实验组.空白组在正常条件下培养;模型组给予 1 μg·mL-1 LPS刺激3 h;对照组在模型组的基础上,给予0.1 μmol·mL-1右美托咪定培养24 h;低、高浓度实验组在模型组的基础上,分别给予0.1 和0.2 μg·mL-1依托咪酯培养24 h.用实时荧光定量聚合酶链反应检测KCs中极化基因的表达水平,用Western blotting法检测KCs细胞NLRP3 小体相关蛋白表达,用酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中IL-1β和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平.结果 分离KCs的ED1阳性率为(96.32 ± 4.82)%.干预后,低、高浓度实验组和空白组、模型组、对照组的 TNF-α mRNA 分别为3.72 ± 0.63,2.46 ± 0.59,0.92 ± 0.11,4.73 ± 0.54 和 3.67 ± 0.61,IL-1β mRNA 分别为5.35 ± 0.63,2.76 ± 0.78,0.82 ± 0.14,7.82 ± 1.37 和5.23 ± 0.54,IL-10 mRNA分别为4.48 ± 0.63,6.92 ± 1.14,0.52 ± 0.21,2.36 ± 0.83和4.35 ± 0.68,NLRP3蛋白分别为1.93 ± 0.19,1.42 ± 0.18,0.73 ± 0.12,2.46 ± 0.27 和1.89 ± 0.23,TNF-α 分 别 为(34.08 ± 4.14),(26.12 ± 5.28),(14.26 ± 2.07),(45.37 ± 5.49)和(33.26 ± 4.96)pg·mL-1,IL-1β分别为(47.92 ± 5.19),(37.02 ± 5.19),(23.08 ± 4.26),(60.48 ± 6.86)和(46.85 ± 6.23)pg·mL-1.模型组的上述指标和空白组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);低、高浓度实验组和对照组的上述指标与模型组相比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);高浓度实验组的上述指标与低浓度实验组和对照组相比较,差异均有统计学意义(均P<0.05).结论 依托咪酯可剂量依赖性地抑制KCs引发的炎性反应,其机制可能与抑制NLRP3/IL-1β通路激活有关.