基于PI3K/Akt/mTOR信号通路探讨27nt-miRNA对血管平滑肌细胞自噬的调控作用

• 作者: 唐华民 李丹 杨鹏 欧和生 沈凤 滕红丽 罗雪兰 覃裕旺 赵燕姣 陶晓静 颜渊鸳
• 来源期刊: 中国临床药理学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: PI3K/Akt/mTOR信号通路 自噬 血管平滑肌细胞
• 年，卷（期）: 2020,（2）
• 所属期刊栏目: 临床与基础桥接研究
• 页码范围: 137-141
• 页数: 5页
• 分类号: R97
• 字数: 4522字
• 语种: 中文
• DOI: 10.13699/j.cnki.1001-6821.2020.02.011

摘要

目的 探讨27nt-miRNA对西罗莫司诱导的血管平滑肌细胞自噬的调控作用及分子机制.方法 将大鼠主动脉血管平滑肌细胞分为正常组、西罗莫司组、27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组和阴性对照组.正常组给予正常培养;西罗莫司组用100 nmol·L-1西罗莫司作用6 h建立自噬模型;27nt-miRNA组、anti-27nt-miRNA组及阴性对照组先转染相应慢病毒载体,待转染成功后用100 nmol·L-1西罗莫司作用6 h建立自噬模型.用实时荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)法验证27nt-miRNA慢病毒稳转细胞株构建情况,用透射电镜观察5组细胞内部自噬小体数量,用四甲基偶氮唑盐法检测5组细胞活性,用Western blot法与qRT-PCR法检测LC3-I/Ⅱ、Beclin-1、PI3K、Akt、p-Akt、mTOR和p-mTOR的蛋白和mRNA表达水平.结果 慢病毒转染细胞成功后27nt-miRNA的表达受到影响;与阴性对照组相比,细胞内自噬小体及自噬溶酶体显著增多,27nt-miRNA 组细胞的活性显著增强[(0.90 ± 0.03)vs.(0.72 ± 0.01),P＜0.05],LC3-I/Ⅱ和 Beclin-1 的蛋白表达量均显著增加[(1.92 ± 0.21)vs.(1.59 ± 0.09),(9.47 ± 0.61)vs.(7.19 ± 1.32),均P＜0.05],LC3-Ⅱ和Beclin-1的mRNA表达量均显著增加[(1.83 ± 0.33)vs.(1.27 ± 0.19),(1.77 ± 0.29)vs.(1.36 ± 0.23),均 P ＜0.05],PI3K/Akt/mTOR信号通路被抑制;与此同时,anti-27nt-miRNA组细胞质内自噬小体及自噬溶酶体显著减少,巨细胞活性显著性降低[(0.60 ± 0.03)vs.(0.72 ± 0.01),P＜0.05],LC3-Ⅱ和Beclin-1 的mRNA相对表达量均显著下降[(0.90 ± 0.25)vs.(1.27 ± 0.19),(0.98 ± 0.24)vs.(1.36 ± 0.23),均P＜0.05].结论 过表达27nt-miRNA可通过抑制PI3K/Akt/mTOR信号通路促进血管平滑肌细胞自噬进而引起细胞过度增殖,27nt-miRNA可能成为心血管疾病的潜在治疗靶点.