ATPase6,8在纳米氧化锌诱导HL-7702细胞线粒体能量代谢障碍中作用

• 作者: 徐幽琼 廖静岚 周美龄 叶友斌 张晓阳
• 来源期刊: 职业与健康
• 学科: 医学
• 关键词: 纳米氧化锌 正常人体肝细胞 能量代谢 线粒体膜电位 线粒体呼吸链复合体V ATPase6,8
• 年，卷（期）: 2020,（22）
• 所属期刊栏目: 实验·监测与检验
• 页码范围: 3050-3055
• 页数: 6页
• 分类号: R114
• 语种: 中文

摘要

目的 分析ATPase6,8在纳米氧化锌(ZnO NP)诱导正常人肝细胞(HL-7702)线粒体氧化磷酸化能量代谢障碍中的作用,为ZnO NP疾病防控提供基础数据.方法 透射电镜和马尔文粒径分析仪测定ZnO NP颗粒表征;ZnO NP染毒24 h后,3-(4,5-二甲基-2-噻唑)-2,5-二甲苯溴化四唑(MTT)法检测细胞活性及剂量选择;激光共聚焦显微镜检测线粒体膜电位改变;高效液相色谱法测定细胞内三磷酸腺苷(ATP)、二磷酸腺苷(ADP)、一磷酸腺苷(AMP)的含量;紫外分光光度计检测线粒体呼吸链复合体V(MRCCV)活性;qRT-PCR检测ATPase6及ATPase8 mRNA表达量.结果 ZnO NP(2.5、5、10、20、40、80、160和320 μg/mL)染毒24 h后,随着ZnO NP剂量增加,细胞存活率逐渐降低(r=-0.859,P＜0.05),80、160、320 μg/mL剂量组细胞存活率显著低于对照组(P＜0.05),根据细胞存活率＞70％,最终选择染毒剂量为0、2.5、10、40 μg/mL;与对照组相比,10和40 μg/mL剂量组红/绿色荧光比值明显减少(P＜0.05),说明细胞线粒体膜电位(MMP)下降;同样40 μg/mL剂量组细胞ATP、总腺普酸含量(TAN)、能荷值(EC)水平均明显下降,10～40 μ.g/mL剂量组细胞AMP水平和2.5～40 μg/mL剂量组细胞ATP/ADP水平也均明显下降(P＜0.01);与对照组相比,2.5～40 μg/mL剂量组细胞MRCC V活性明显降低而ATPase6和ATPase8 mRNA表达水平均显著上升(P＜0.01).结论 ZnO NP能诱导HL-7702线粒体能量代谢障碍,可能是通过影响细胞线粒体ATPase6,8 mRNA的表达水平,进而引起MRCC V活性降低及线粒体MMP下降,氧化磷酸化无法正常进行,ATP生成过程受到抑制,最终导致线粒体能量代谢障碍.