小白菊内酯对肝癌HepG2细胞凋亡作用及其机制

• 作者: 徐伟华 葛科立 郭云良 綦萍萍 孙锐 周永红
• 来源期刊: 青岛大学学报（医学版）
• 关键词: 小白菊内酯 癌 肝细胞 活性氧 细胞凋亡
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 肿瘤学专题
• 页码范围: 25-29
• 页数: 5页
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.11712/jms.2096-5532.2021.57.033

摘要

目的 探讨小白菊内酯(PN)对人肝癌HepG2细胞的抗肿瘤作用及其机制.方法 取对数生长期的HepG2细胞分成两组,DMSO组以换液形式加入含1/1000 DMSO的DMEM高糖培养基,PN处理组分别加入PN浓度为15.0、17.5、20.0、22.5、25.0、27.5μmol/L的DMEM高糖培养基,应用WST-8法检测PN处理24、48、72 h对HepG2细胞活力的影响.取对数生长期的HepG2细胞,随机分为DMSO组与PN(25.0μmol/L)处理组(6、12、24 h),流式细胞术检测PN对HepG2细胞内Ca2+水平、线粒体膜电位、凋亡细胞比例的影响,Western blot法检测PN对细胞凋亡相关蛋白(Caspase-3、Caspase-9、FLIPL、FLIPS、LC3-Ⅱ、Beclin-1、P62)的影响,DCFH-DA探针流式细胞术检测活性氧(ROS)水平,比色法检测PN对细胞内谷胱甘肽(GSH)生成的影响,以及联合使用N-乙酰-L-半胱氨酸(NAC)1 mmol/L处理细胞24 h对上述指标的影响.结果 与DMSO组相比,随着PN作用浓度以及时间的增加,细胞活力明显降低(F浓度=1778.0,F时间=439.4,F交互=44.3,P<0.01).PN作用细胞24 h,细胞内Ca2+水平明显升高(t=31.58,P<0.01).PN组随着作用时间延长,线粒体膜电位显著下降(F=971.1,P<0.01),凋亡细胞比例升高(F=211.3,P<0.01),Caspase-3、Caspase-9活化增加(F=430.9、866.0,P<0.01),FLIPL和FLIPS表达下降(F=57.8、83.3,P<0.01),LC3-Ⅱ和Beclin-1蛋白表达上调(F=2219.0、527.7,P<0.01),P62蛋白表达下调(F=1533.0,P<0.01),而HepG2细胞中ROS水平明显升高(t=18.06,P<0.01)、GSH水平明显降低(F=263.4,P<0.01).联合应用NAC处理24 h后,PN诱导的细胞凋亡增加、ROS水平升高和GSH水平降低均明显减弱,与DMSO组比较差异无显著性(P>0.05).结论 PN可能通过减少HepG2细胞内GSH产生,诱导细胞内ROS水平升高,进而诱导细胞凋亡与自噬.