小肠结肠炎耶尔森氏菌可视化LAMP检测方法的建立

• 作者: 徐云明 朱孟玲 杨剑波 孙智远 卞蓉蓉 陈爱宁 郭丽娟 孙玉琴 王一伊 郑墁墁 仲思远 周弇扬 李叶辉 柳增善 任洪林
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 小肠结肠炎耶尔森氏菌 LAMP 可视化检测
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 281-288
• 页数: 8页
• 分类号: S852.723
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0045

摘要

通过优化LAMP反应体系中镁离子、甜菜碱、dNTP等反应组成成分,而后进行特异性试验,并优化钙黄绿素与氯化锰的比例放入LAMP体系内,最后应用LAMP检测含有小肠结肠炎耶尔森氏菌(耶氏菌)的肉品,从而建立一种能够检测耶氏菌并通过肉眼观察和判断试验结果的LAMP方法.结果 显示,优化的25 μL反应体系如下:9 mmol/L Mg2+、1.8 mmol/L dNTPs、1.0 mol/L betaine、0.2 μ mol/L外引物、0.8μmol/L内引物、1 μL Bst DNA polymerase(8 U/μL)、2.5 μL 10×thermpol reaction buffer、228 μmol/L钙黄绿素、324 μmol/L氯化锰,反应温度65℃孵育60 min.LAMP检测耶氏菌基因组DNA的最低检测限是85.3×101ng/μL,比文献PCR方法灵敏性高出2个数量级.LAMP方法对耶氏菌gDNA的最低检测限对应的基因拷贝数最低检测限是35,对应的CFU最低检测限是7×102 CFU/mL.本试验建立的这种可视化的检测耶氏菌的LAMP方法,为耶氏菌的检测提供了一种新的参考.