甘薯黑斑病菌木聚糖酶xylanase1基因敲除体系的建立

• 作者: 纪洪涛 刘德龙 汪文静 刘美艳 朱明库
• 来源期刊: 江苏师范大学学报（自然科学版）
• 关键词: 甘薯 甘薯黑斑病 木聚糖酶 同源重组 基因敲除
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 甘薯生物学与产业技术|Biology & Industry Technology of Sweetpotato
• 页码范围: 26-31
• 页数: 6页
• 分类号: Q933|S531
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-4298.2021.01.005

摘要

由甘薯长喙壳菌(Ceratocystis fimbriata Ellis.et Halsted)引起的黑斑病是严重危害甘薯的病害之一,但目前甘薯黑斑病菌致病的分子机制尚不明确.本研究以徐州农科院甘薯病虫害防控研究室田间分离的黑斑病菌为材料,以广泛存在于植物病原真菌中的木聚糖酶基因xylanase1为例,参考其他常见植物病原真菌的基因敲除方法,优化原生质体制备步骤、基因融合片段合成方法及PEG介导的转化过程,结果发现,黑斑病菌菌丝体在质量分数为2％的纤维素酶(Cellulase)、2％的溶壁酶(Lysing Enzyme)、2％的崩溃酶(Driselase)的混合酶液中震荡酶解4 h,即可获得转化所需的高质量原生质体.通过2轮融合PCR合成Xyl-Up::HYG::Xyl-Down片段,借助改良的PEG转化技术,成功地敲除黑斑病菌中的木聚糖酶基因xylanase 1.该敲除体系的建立,为深入研究甘薯黑斑病菌分子致病机制提供了技术保证.