腹膜透析滤出液外泌体miR-200a在不同腹膜转运特性患者中的表达差异及其生物学功能预测

• 作者: 佟琰 方均燕 邓海 宋阿会 李璞 刘英莉
• 来源期刊: 上海交通大学学报（医学版）
• 学科: 医学
• 关键词: 腹膜透析滤出液 外泌体 miR-200a 腹膜转运特性 生物信息学
• 年，卷（期）: 2021,（1）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 42-48
• 页数: 7页
• 分类号: R459.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1674-8115.2021.01.007

摘要

目的·提取和鉴定腹膜透析滤出液(peritoneal dialysis effluent,PDE)外泌体,比较不同腹膜转运特性患者PDE外泌体miR-200a的表达水平,预测其潜在靶基因及参与的生物学过程.方法·将20例腹膜透析(peritoneal dialysis,PD)患者按照腹膜平衡实验(peritoneal equilibrium test,PET)值分为H组(高转运/高平均转运)和L组(低转运/低平均转运).每位患者收集500 mL留腹过夜PDE,浓缩后超速离心,透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)、纳米粒子跟踪分析(nanoparticle tracking analysis,NTA)和Western blotting鉴定外泌体.提取外泌体miRNA,实时荧光定量PCR检测2组患者PDE外泌体miR-200a的表达水平,分析其与PET值和超滤量的相关性.利用Targetscan、miRmap和miRWalk数据库预测miR-200a的靶基因,用DAVID数据库进行基因功能(gene ontology,GO)富集分析.结果·浓缩的PDE超速离心后提取到的外泌体,TEM下呈双层膜包裹的圆形囊泡,NTA显示其直径大多在50～150 nm,表面具有外泌体标志蛋白CD9和CD63.L组中PDE外泌体miR-200a的相对表达量显著高于H组,并且与PET值呈负相关(r=-0.871,P=0.000),与4 h超滤量呈正相关(r=0.448,P=0.048),但与24 h超滤量无相关性(r=0.355,P=0.125).生物信息学分析发现共有679种基因可由3个数据库共同预测到;GO分析显示这些靶基因不仅参与正向调控间充质细胞增殖,也在金属离子结合方面有一定富集.结论·PDE中存在外泌体,腹膜转运特性较低的患者PDE外泌体miR-200a相对表达量较高,其与PET值呈负相关,与4 h超滤量呈正相关.miR-200a的潜在靶基因众多,可能通过不同生物学过程影响腹膜转运特性.