破骨细胞建模方法的探索

• 作者: 杨一秋 李兰 解继胜
• 来源期刊: 右江民族医学院学报
• 关键词: RAW264.7细胞 破骨细胞 NFATc1 TRAP MMP-9
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 论著与临床报道
• 页码范围: 306-309
• 页数: 4页
• 分类号: R68
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1001-5817.2021.03.003

摘要

目的 探索RAW264.7细胞向破骨细胞分化的最佳条件,为后续的实验研究提供一个可靠的破骨细胞建模方式.方法 将RAW264.7细胞以每孔2×104个、每孔3×103个分别接种到6孔板、24孔板中,待贴壁24 h后更换为含20 ng/ml的巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)、50 ng/ml的核因子κB受体活化因子配体(RANKL)的诱导液诱导培养,每隔2 d换液一次,待镜下观察到较多破骨细胞时进行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色并利用实时荧光定量PCR检测活化T-细胞核因子1(NFATc1)、TRAP、基质金属蛋白酶9(MMP-9)的mRNA表达水平.结果 经过诱导培养3 d时破骨细胞开始聚集生长,出现多个核,但整体阳性破骨细胞不是太多,待诱导至4～6d时,可见到较大面积的破骨细胞,细胞核增多达数十个,细胞质也非常丰富;与对照组相比,诱导组NFATc1、TRAP、MMP-9的mRNA表达水平上调.NFATc1、MMP-9与对照组的差异有统计学意义(P<0.05),但是TRAP与对照组的差异没有统计学意义.结论 RAW264.7细胞在20 ng/ml的M-CSF、50 ng/ml的RANKL这两种细胞因子存在的条件下经过4～6 d培养可以被诱导为破骨细胞.