基于非洲猪瘟病毒pA104R蛋白的间接ELISA检测方法的建立与应用

• 作者: 王兆贵 赵亚茹 杨吉飞 牛庆丽 刘银光 敬梦瑶 杨赛霞 吕欣倩 刘猛 姚永海 关贵全 刘志杰 殷宏
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 关键词: 非洲猪瘟 非洲猪瘟病毒 蛋白纯化 间接ELISA
• 年，卷（期）: 2021,（4）
• 所属期刊栏目: 预防兽医学
• 页码范围: 403-411
• 页数: 9页
• 分类号: S852.659.1
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2021.0084

摘要

非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是由非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)引起的一种危害性极强的病毒性疾病,该病的发生和流行对全球养猪业、猪肉食品供应及经济发展造成了巨大影响.ASFV基因组较大、编码蛋白众多,但目前很多病毒蛋白的功能尚不清楚.由于缺乏有效的治疗措施和安全的疫苗,所以ASF的防控及疫区的净化仍然面临巨大挑战,而早期、快速、可靠的实验室诊断仍然是该病防控的重要手段.本研究以ASFV基因Ⅱ型毒株的基因组为模板,扩增A104R、B602L、CP204L (P30)、B646L(P72)和K205R基因,并将其克隆至表达载体pET-30a,构建原核表达质粒,经IPTG诱导后表达5种病毒蛋白,其中pA104R、pK205R为可溶性表达,P30、P72、pB602L为包涵体表达.经Western-blot分析鉴定蛋白的抗原性,五种原核表达的蛋白都能够和ASF阳性血清发生特异性反应,通过比较,筛选出pA104R作为最佳诊断抗原,并初步建立了ASFV抗体检测间接ELISA方法.该方法能够敏感、特异的检测ASFV阳性血清,而与猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)、猪瘟病毒(CSFV)、伪狂犬病病毒(PRV)、口蹄疫病毒(FMDV)阳性血清均无交叉反应.利用建立的间接ELISA方法与商品化间接ELISA抗体检测试剂盒平行检测田间样本,结果表明,本研究建立的方法与商品化试剂盒之间的符合率达到94.7％(142/150).上述结果表明,本研究建立的间接ELISA方法能够用于ASF血清抗体的检测.