黄色链霉菌TRM45540遗传转化系统的构建

• 作者: 夏影影 张巧燕 邢利 陈乙煌 黄建军 罗晓霞
• 来源期刊: 塔里木大学学报
• 关键词: 黄色链霉菌 接合转移 遗传转化
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 生物资源|Biological Resources
• 页码范围: 33-38
• 页数: 6页
• 分类号: Q933
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-0568.2021.03.005

摘要

黄色链霉菌(Streptomyces luteus)TRM45540是分离自新疆罗布泊土壤的高产放线菌素D的链霉菌新物种,为了深入挖掘其基因功能和代谢活性,需要建立该菌株的遗传转化系统.本研究以整合型载体pSET152和自杀型载体pKC1139为出发质粒,ET12567(pUZ8002)为供体菌,TRM45540为受体菌,通过大肠杆菌-链霉菌属间接合转移方法建立TRM45540遗传转化系统.MS培养基为最适产孢培养基和接合子最适生长培养基,TRM45540菌株对安普霉素(APR)、硫链丝菌素(THIO)和卡那霉素(KAN)敏感;TSB培养基为大肠杆菌-黄色链霉菌属间接合转移最适培养基;最适萌发时间为4 h.结果表明:TRM45540菌株接合转移系统通过MS培养基培养收集孢子,将收集的孢子于TSB培养基中50℃热激10 min,37℃萌发4 h后,与供体菌ET12567(pUZ8002)在MS培养基上进行接合转移,接合转移的抗性筛选标记可以采用APR抗性、THIO抗性和KAN抗性.本研究成功构建TRM45540菌株的遗传转化系统,为后期进行遗传转化研究奠定了基础.