Src家族调控Tau蛋白磷酸化作用及机制研究

• 作者: 钱时德 谷费菲 赵全 胡子奇 焦冬生
• 来源期刊: 心脑血管病防治
• 关键词: Src家族 Fyn Tau蛋白 酪氨酸磷酸化 自噬
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 基础研究|Basic research
• 页码范围: 239-243,247
• 页数: 6页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1009-816x.2021.03.008

摘要

目的 探讨Tau蛋白酪氨酸磷酸化对其表达的影响及Src家族在其酪氨酸磷酸化中作用及分子机制.?方法 采用无缝克隆方法构建Src家族(Src、Fyn、Yes、Lck、Blk、Fgr、Lyn和Hck)质粒;Western blot检测HEK-293T和SHSY-5Y细胞共转染hTau(2N4R)-V5和Src家族24h后磷酸化和总Tau蛋白表达;免疫荧光和Western blot检测HEK-293T中hTau(2N4R)酪氨酸磷酸化(Tyrosine,Y)突变质粒hTau蛋白表达;Western blot检测转染hTau的HEK-293T细胞在共转染Fyn或Src质粒后Tau、Fyn和p-Tyr蛋白表达;Western blot检测转染hTau的Fyn KO的SHSY-5Y细胞中Fyn、Tau、Y394、P62和LC3II/I表达;免疫荧光检测PS19和WT小鼠神经元Y383表达;Western blot检测PS19和WT小鼠海马神经元原代细胞中Fyn、Y383、P62和LC3II/I表达. 结果Src和Fyn组HEK293T细胞的hTau-V5、Tau5、Tau5A6、Tau46和DakoTau蛋白表达显著高于Con组,差异有统计学意义(t=14.625、15.550、32.269、28.172、38.516,P<0.05);Yes、Lck、Blk、Fgr、Lyn和Hck组无明显变化(P>0.05);与Con组相比,Src家族HEK293T和SHSY-5Y细胞的pT231、pS202、pS396/404、p-S262/356和pT181蛋白表达无统计学意义(P>0.05);与WT、Y18F、Y29F、Y197F和Y310F组相比,Y394F组V5和DakoTau蛋白显著降低(t=12.762、18.964,P<0.05);共转染Fyn的Y394F组HEK293T细胞的hTau-V5、DakoTau和p-Tyr蛋白表达显著低于共转染Fyn的WT组(t=11.471、10.285、9.344,P<0.05),Fyn-GFP和Fyn蛋白表达无统计学意义(P>0.05);与共转染Src的WT相比,Y394F和5YF组的hTau-V5、DakoTau、Fyn-GFP和Fyn蛋白表达无统计学意义(P>0.05),p-Tyr蛋白表达明显降低(t=36.261、15.514,P<0.05);转染Fyn-KO的SHSY-5Y细胞中Y394、P62和hTau蛋白表达明显低于Fyn-WT组(t=15.562、39.298、22.374,P<0.05),LC3II/LC3I蛋白表达比例明显高于Fyn-WT组(t=56.261,P<0.05);PS19小鼠海马Y383(人Y394)、Fyn、P62蛋白表达明显升高(t=9.120、18.626、22.194,P<0.05),LC3II/LC3I蛋白表达显著降低(t=45.689,P<0.05).?结论 Fyn蛋白调控Tau蛋白Y394位点酪氨酸磷酸化影响Tau蛋白表达,通过下调Fyn可激活自噬抑制Tau蛋白的表达.