miR-20a靶向TLR4通路对巨噬细胞抗结核分枝杆菌感染作用的影响

• 作者: 王玲 孟伟民
• 来源期刊: 山西医科大学学报
• 关键词: miR-20a Toll样受体4 巨噬细胞 结核分枝杆菌
• 年，卷（期）: 2021,（3）
• 所属期刊栏目: 基础医学|Basic Medicine
• 页码范围: 289-295
• 页数: 7页
• 分类号: R363
• 语种: 中文
• DOI: 10.13753/j.issn.1007-6611.2021.03.008

摘要

目的 探讨miR-20a能否通过靶向Toll样受体4(TLR4)通路影响巨噬细胞THP-1的抗结核分枝杆菌(Mtb)感染作用.方法 培养并诱导人源性THP-1单核细胞分化为THP-1巨噬细胞,H37Ra Mtb菌按照感染复数MOI=10对巨噬细胞THP-1进行感染,将感染细胞分为感染组、阴性转染组和miR-20a mimics组,另选取未感染巨噬细胞THP-1作为未感染组.CCK-8法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡率,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)法检测细胞miR-20a的表达.应用Star-base数据库预测miR-20a的靶基因并用双荧光素酶报告基因实验加以验证.应用蛋白免疫印迹(WB)法检测miR-20a过表达对Mtb感染的巨噬细胞THP-1中Bcl-2、Bim和TLR4、MyD88、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)、p-MAPK表达的影响.结果 与未感染组比较,Mtb感染组巨噬细胞THP-1中miR-20a表达显著降低(P<0.05),且随着感染时间的增加,miR-20a表达显著下降(P<0.05).与未感染组比较,感染组巨噬细胞THP-1细胞活力、抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著降低(P<0.05),细胞凋亡率、凋亡蛋白Bim及TLR4、MyD88、p-MAPK表达显著升高(P<0.05).与感染组和阴性转染组比较,miR-20a mimics组miR-20a表达和细胞活力显著升高(P<0.05),细胞凋亡率和凋亡蛋白Bim的表达显著降低(P<0.05),抗凋亡蛋白Bcl-2表达显著升高(P<0.05).Starbase数据库预测显示TLR4是miR-20a的潜在靶基因,双荧光素酶报告基因实验证实二者存在靶向关系.Western blot结果显示miR-20a过表达后,Mtb感染的巨噬细胞THP-1中TLR4、MyD88、p-MAPK表达显著下调.结论 miR-20a过表达可靶向激活TLR4通路抑制巨噬细胞凋亡,进而抑制清除Mtb的能力.