寨卡病毒包膜蛋白Y158H突变对乙脑/寨卡嵌合病毒感染小鼠脑内神经毒力的影响

• 作者: 李玥珂 冯亚岚 任阳 陈岚 黄荣 周仲辉 杨健
• 来源期刊: 中国病原生物学杂志
• 关键词: 乙脑/寨卡嵌合病毒 E蛋白 突变 神经毒力
• 年，卷（期）: 2021,（6）
• 所属期刊栏目: 论著|ORIGINAL ARTICLES
• 页码范围: 655-660
• 页数: 6页
• 分类号: R373.3
• 语种: 中文
• DOI: 10.13350/j.cjpb.210608

摘要

目的 研究乙脑/寨卡嵌合病毒(Japanese encephalitis/Zika chimeric virus,JE/ZIKV)包膜蛋白(envelope pro-tein,E蛋白)第158位氨基酸Y158H突变对感染小鼠脑内神经毒力的影响.方法 运用重叠延伸PCR技术和基因克隆技术构建含Y158H突变全长cDNA的质粒,单酶切形成线性化DNA分子后体外转录获得RNA,电转染BHK21细胞完成重组病毒包装.通过病毒基因测序、间接免疫荧光试验、生长曲线及蚀斑试验鉴定病毒,通过动物试验评价病毒的小鼠脑内神经毒力.结果 基因测序和酶切证实,成功构建含突变位点Y158H全长cDNA质粒.蚀斑试验和病毒基因测序、间接免疫荧光试验证实成功完成病毒的拯救,JE/ZIKV蚀斑直径(1.7±0.2)mm,JE/ZIKV(Y158H)蚀斑直径(1.6±0.1)mm,两种病毒的蚀斑大小差异无统计学意义(P＞0.05).两种病毒增殖规律相似,但整个过程中JE/ZIKV(Y158H)的增殖效率略低于母本病毒.分别用两种病毒进行动物试验,JE/ZIKV(Y158H)的LD.为58.93 PFU/0.03 ml,JE/ZIKV为2.21 PFU/0.03 ml,JE/ZIKV(Y158H)的毒力低于JE/ZIKV.结论 ZIKV E蛋白Y158H位点突变可降低嵌合病毒对小鼠脑内神经毒力,E158是影响E蛋白神经毒力的重要氨基酸之一.