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血管性血友病因子裂解酶CysR结构域生物学功能的研究
血管性血友病因子裂解酶CysR结构域生物学功能的研究
作者:
吴昊
李华
苏畅
李鸿雁
崔日花
金圣宇
基本信息来源于合作网站,原文需代理用户跳转至来源网站获取
血管性血友病因子裂解酶
富含半胱氨酸结构域
血管性血友病因子
血栓性血小板减少性紫癜
摘要:
目的:研究血管性血友病因子裂解酶(ADAMTS13)富含半胱氨酸(CysR)结构域在血管性血友病因子(vWF)裂解中的生物学功能,为探明血栓性血小板减少性紫癜(TTP)的发病机制提供实验证据.方法:利用点突变技术对ADAMTS13 CysR结构域中的EDGTLS氨基酸残基进行基因突变,制备质粒,表达并提纯蛋白.1%SeaKem HGT琼脂糖凝胶分离后用Western blot方法观察野生型和突变型ADAMTS13在变性条件或剪切应力作用下对底物vWF的裂解活性.结果:成功构建了 ADAMTS13突变体质粒(M1:Glu515Ala;M2:Asp516Ala;M3:Gly517Ala;M4:Thr518Ala;M5:Leu519Ala;M6:Ser520Al).野生型和突变型ADAMTS13质粒在 HEK293细胞中稳定表达,并提纯蛋白.在变性条件下,野生型ADAMTS13基本完全裂解了 vWF多聚体,而突变体M1裂解vWF多聚体的活性显著降低(P<0.01).在体外剪切应力作用下,与野生型ADAMTS13相比,突变体M1对vWF多聚体的裂解能力显著降低(P<0.01).突变体M1对FRETS-vWF73的剪切能力与野生型ADAMTS13相比显著降低.与野生型ADAMTS13相比,突变体M1与vWF之间的结合力未见明显降低.结论:在变性条件和剪切应力作用下,ADAMTS13 CysR结构域在酶切vWF多聚体的过程中起着重要作用,其中Glu515可能是底物识别的重要作用位点.
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篇名
血管性血友病因子裂解酶CysR结构域生物学功能的研究
来源期刊
中国实验血液学杂志
学科
关键词
血管性血友病因子裂解酶
富含半胱氨酸结构域
血管性血友病因子
血栓性血小板减少性紫癜
年,卷(期)
2021,(3)
所属期刊栏目
贫血病与血小板、血栓疾病|Anemia,Platelet Disease and Thrombosis
研究方向
页码范围
893-900
页数
8页
分类号
R554.6
字数
语种
中文
DOI
10.19746/j.cnki.issn1009-2137.2021.03.038
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传播情况
被引次数趋势
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研究来源
研究分支
研究去脉
引文网络交叉学科
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期刊影响力
中国实验血液学杂志
主办单位:
中国病理生理学会
出版周期:
双月刊
ISSN:
1009-2137
CN:
11-4423/R
开本:
大16开
出版地:
北京太平路27号
邮发代号:
2-389
创刊时间:
1993
语种:
chi
出版文献量(篇)
6154
总下载数(次)
16
总被引数(次)
34135
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