Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及机制探讨

• 作者: 沈惠 欧海斌 邵晶 江耀飞 刘羽 张俊红 谢丛华
• 来源期刊: 中华放射肿瘤学杂志
• 关键词: 肌球蛋白X CRISPR/Cas9技术 放射敏感性 H1975细胞系
• 年，卷（期）: 2021,（9）
• 所属期刊栏目: 物理·技术·生物
• 页码范围: 949-955
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn113030-20200209-00051

摘要

目的:探讨Myosin X对肺癌H1975细胞系放射敏感性调节及相关机制。方法:蛋白免疫印迹法检测肺癌细胞系中Myosin X表达量以获取实验对象。运用CRISPR/Cas9技术建立敲除Myosin X的H1975细胞系(KO组)和感染对照病毒的H1975细胞系(NC组)，并进行敲除效率验证。克隆形成实验及多靶单击模型检测两组细胞对射线敏感性差异。γ-H 2AX焦点形成实验及RNAseq差异分析技术寻找可能参与Myonsin X介导的肺癌细胞系放射敏感性调节机制。 结果:Myosin X在H1975细胞中表达量明显高于其他细胞系( P<0.01)。经鉴定成功构建了Myosin X sgRNA-Lenti-CRISPR v2慢病毒载体，嘌呤霉素筛选后得到Myosin X完全敲除的H1975(KO组)及对照组(NC组)细胞系。克隆形成实验证明相较于NC组，KO组对射线的敏感性更强(D 0值从1.28 Gy下降至1.03 Gy，SF 2从0.29下降至0.21，放射敏感性比为1.24)。γ-H 2AX焦点形成实验显示照后1、6 h KO组形成的损伤焦点数均多于NC组( P<0.05)，RNAseq差异分析技术结果显示KO组ISLR蛋白表达明显低于NC组( P<0.05)。 结论:敲除Myosin X可以增强肺癌H1975细胞的放射敏感性，其机制可能与干扰DNA双链损伤修复以及降低ISLR表达有关。