3D聚合酶突变对肠道病毒A组71型复制影响的研究

• 作者: 朱颖 翁育伟
• 来源期刊: 中国人兽共患病学报
• 学科: 医学
• 关键词: 肠道病毒A组71型 3D聚合酶 突变 病毒拯救 病毒复制
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 实验研究|Experimental Studies
• 页码范围: 1078-1083
• 页数: 6页
• 分类号: R512.6
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1002-2694.2021.00.163

摘要

目的 研究3D聚合酶(3D polymerase,3Dpol)突变对肠道病毒A组71型(Enterovirus A71,EV-A71)复制的影响.方法 扩增EV-A71病毒基因组并克隆至TOPO-XL2-PCR载体;应用体外点突变方法在病毒3Dpol 区引入N16S和I256V突变;采用T7聚合酶转录病毒基因组RNA并转染RD细胞,获得N16S和I256V病毒突变株.观察亲本病毒与突变病毒株的增殖特征以及病毒RNA含量.结果 RNA转染RD细胞后可获得具有感染性的病毒.体外增殖试验显示,正常培养条件下(36.5℃)3株病毒增殖趋势一致,感染细胞72 h后病毒滴度和RNA拷贝数均达到峰值且组间差异无统计学意义.温度敏感性试验显示,与正常培养条件比较,病毒在高温(39.5℃)的滴度和RNA拷贝数均大幅下降,并且高温对N16S和I256V突变株的增殖抑制较亲本株更为显著.结论 成功构建EV-A71感染性克隆并获得病毒突变株,3Dpol的N16S和I256V突变在高温条件下可能进一步降低病毒复制能力.