微小核糖核酸-1205沉默Cullin-RING泛素E3连接酶4A激活AMPK信号传导保护人成骨细胞免受地塞米松损伤的研究

• 作者: 王光阳 庄宇 费昊东 季峰 王守国
• 来源期刊: 中华骨与关节外科杂志
• 关键词: 地塞米松 成骨细胞 Cullin-RING泛素E3连接酶4A 腺苷酸活化蛋白激酶 微小核糖核酸-1205
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 基础研究|Basic Research
• 页码范围: 1022-1029
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.2095-9958.2021.12.09

摘要

目的:腺苷酸活化蛋白激酶(AMPK)激活可以抑制地塞米松(Dex)诱导的成骨细胞损伤.Cullin-RING泛素E3连接酶4A(CUL4A)决定了AMPKα泛素化和蛋白酶体降解.本研究鉴定了一种新型的靶向CUL4A的微小核糖核酸-1205(miR-1205).方法:为了研究miR-1205对Dex诱导人类成骨细胞的氧化损伤和细胞死亡的影响,对hFOB1.19成骨细胞和原代人成骨细胞进行培养和分化,提取第3～10代的原始人类成骨细胞总细胞RNA,并通过反转录获得cDNA.利用qPCR、2ΔΔCt方法进行数据定量,分析miR-1205的表达.将生成表达premiR-1205的慢病毒(lv-premiR-1205)或miR-1205反义慢病毒(lv-antagomiR-1205),进行过滤并添加至hFOB1.19细胞或人成骨细胞.将细胞接种到六孔板中,通过miR模拟物转染,进行遗传修饰.检查CUL4A 3'-UTR荧光素酶的活性,并对结果进行量化.在对hFOB1.19细胞使用Dex处理后,对细胞功能包括细胞生存力测定,细胞死亡检测,以及通过核TUNEL染色和caspase-3活性测定及Western印迹测定进行细胞凋亡检查.结果:将CUL4A七个靶向miRNA模拟物中的每一个都分别转染到hFOB1.19成骨细胞中.其中,miR-1205模拟物导致最显著的CUL4A mRNA降低.miR-1205的亚细胞分布表明,内源性miR-1205的大部分位于细胞质中.生物素化的miR-1205与hFOB1.19细胞中的CUL4A mRNA直接关联并使其沉默,从而导致AMPK级联激活,并显著减弱hFOB1.19细胞中Dex诱导的细胞毒性.此外,miR-1205的过表达显著抑制了hFOB1.19细胞中Dex诱导的凋亡激活.结论:在hFOB1.19细胞和人类成骨细胞中,通过miR-1205沉默CUL4A,激活了AMPK信号传导,并调节其下游靶标发挥有效的抗氧化活性,极大减弱Dex诱导的细胞毒性,从而显著保护成骨细胞.