聚乙二醇化重组人干扰素α2b位置异构体比例离子交换高效液相色谱测定法的建立及修饰位点分析

• 作者: 董世建 许培 章良弼 李增礼 程婷 王荣海 魏兆军
• 来源期刊: 中国生物制品学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 聚乙二醇化重组人干扰素α2b 位置异构体 离子交换高效液相色谱 修饰位点
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 技术方法
• 页码范围: 1501-1505,1510
• 页数: 6页
• 分类号: R917
• 语种: 中文

摘要

目的 建立聚乙二醇化重组人干扰素α2b(PEGylated recombinant human interferonα2b,PEG-rhIFNα2b)位置异构体比例的离子交换高效液相色谱(ion exchange high performance liquid chromatography,IEC-HPLC)测定法,并对各异构体修饰位点进行分析.方法 色谱柱采用Proteomix SCX-NP10(10.0 mm×250 mm,10 μm);流动相A为:1.8 mmol/L一水合柠檬酸-3.3 mmol/L十二水合磷酸氢二钠(pH 5.3),流动相B为:30 mmol/L柠檬酸三钠-35 mmol/L二水合磷酸二氢钠(pH 6.0);线性梯度洗脱:0～180 min (0％B→12％B),180～220 min(12％B→15％ B);流速为:0.4 mL/min;柱温为:25℃;进样量:不低于100 μg.同时对IEC-HPLC法进行专属性及重复性验证.采用建立的方法测定3批PEG-rhIFNα2b的位置异构体比例,并通过SPSS 19.0软件进行分析,拟定5个位置异构体比例质量标准.采用建立的方法富集5个位置异构体的洗脱峰,进行修饰位点定位.结果 空白对照和rhIFNα2b原液无色谱峰出现,对PEG-rhIFNα2b位置异构体测定无干扰,PEG-rhIFNα2b可见5个异构体峰,且分离度良好;同批PEG-rhIFNα2b连续测定3d,峰1、2、3、4和5面积的总RSD分别为1.96％、2.53％、2.54％、1.05％和1.86％,均＜3.0％.PEG-rhIFNα2b的5个位置异构体比例质量标准可拟定为:峰1为5％～9％、峰2为14％～21％、峰3为7％～10％、峰4为30％～34％、峰5为31％～39％.PEG-rhIFNα2b位置异构体峰1修饰位点主要为K31,峰2主要为K134,峰3主要为K131和K164,峰4主要为K83,峰5主要为K121,未检测到N-末端PEG修饰.结论 建立了PEG-rhIFNα2b位置异构体比例的IEC-HPLC测定法,该方法具有良好的专属性及重复性,可用于PEG-rhIFNα2b位置异构体比例的测定.