Necrostatin-1对压力诱导的髓核细胞自噬及凋亡的影响

• 作者: 陈松峰 寇红伟 尚国伟 陈向荣 姬彦辉 王永魁 苏会芳 冷子宽 尚春风 朱迪 宋宗冕 刘宏建
• 来源期刊: 中华实验外科杂志
• 关键词: 压力 髓核细胞 自噬 凋亡
• 年，卷（期）: 2021,（5）
• 所属期刊栏目: 实验研究
• 页码范围: 878-881
• 页数: 4页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn421213-20200925-01338

摘要

目的:观察Necrostatin-1对压力诱导的大鼠髓核细胞自噬及凋亡的影响。方法:从3月龄大鼠腰段脊柱提取髓核细胞，选取第2代细胞进行实验，分为对照(生理盐水)组和Necrostatin-1组，1.0 Mpa压力条件下培养0、24、36 h。单丹黄酰尸胺(MDC)染色荧光显微镜观察自噬泡及细胞膜上MDC荧光表达情况，流式细胞仪检测MDC阳性率。膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)染色流式细胞仪定量Annexin V阳性率；Hoechst 33258染色荧光显微镜观测细胞凋亡。反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法检测自噬相关基因Beclin1、LC3B和凋亡相关基因半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-3、B细胞淋巴瘤/白血病-2相关X蛋白(bax)的表达水平。组间比较采用 t检验。 结果:压力作用24、36 h，荧光显微镜观察显示，与对照组比较，Necrostatin-1可明显下调细胞MDC及Hoechst 33258的荧光强度。流式检测显示，与对照组24、36 h的MDC阳性率(13.97±0.85、23.52±1.92)%及Annexin V阳性率(12.72±0.89、22.13±1.46)%比较，Necrostatin-1可明显下调MDC阳性率( t＝5.530、4.977， P<0.05)及Annexin V阳性率( t＝4.702、4.970， P<0.05)，差异有统计学意义。RT-PCR结果显示，与对照组24、36 h的Beclin1(2.76±0.13、2.65±0.14)、LC3B(3.62±0.18、4.54±0.65)及Caspase-3(2.04±0.15、3.28±0.39)、bax(3.56±0.42、4.82±0.66)基因表达比较，Necrostatin-1可明显抑制24、36 h压力诱导Beclin1( t＝8.192、2.836， P<0.05)、LC3B( t＝9.013、3.072， P<0.05)及Caspase-3( t＝3.048、3.277， P<0.05)、bax( t＝4.241、2.850， P<0.05)的基因表达，差异均有统计学意义。 结论:Necrostatin-1可明显抑制压力诱导的髓核细胞自噬及凋亡。