侵染广东省葫芦科作物的中国南瓜曲叶病毒的分子特征

• 作者: 张丽 汤亚飞 李正刚 于琳 蓝国兵 佘小漫 何自福
• 来源期刊: 中国农业科学
• 关键词: 中国南瓜曲叶病毒 广东省 分子特征 侵染性克隆 致病性
• 年，卷（期）: 2021,（19）
• 所属期刊栏目: 植物保护|PLANT PROTECTION
• 页码范围: 4097-4109
• 页数: 13页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3864/j.issn.0578-1752.2021.19.006

摘要

[目的]中国南瓜曲叶病毒(squash leaf curl China virus,SLCCNV)是危害葫芦科作物的主要病毒之一,可侵染南瓜、葫芦、冬瓜、黄瓜、甜瓜、哈密瓜,严重影响葫芦科作物生产.论文旨在探究SLCCNV广东分离物的分子特征、亲缘关系及其致病性,为SLCCNV的防控提供科学依据.[方法]从广东省湛江市雷州市和徐闻县、惠州市博罗县、河源市源城区以及佛山市高明区共采集53份疑似感染菜豆金色黄花叶病毒属(Begomovirus)病毒的葫芦科作物病样,提取总DNA,利用菜豆金色黄花叶病毒属通用引物AV494/CoPR进行PCR检测.选取PCR检测为阳性的样品进行RCA扩增、酶切、克隆及测序,获得各分离物基因组A组分(DNA-A)的全长序列;同时利用背向引物PCR扩增、克隆及测序,获得各分离物基因组B组分(DNA-B)的全长序列.将得到的SLCCNV广东分离物DNA-A和DNA-B全长序列在NCBI中进行BLAST分析,利用SDT1.2软件MUSCLE alignment方法对序列相似性作进一步比较分析,应用MEGA7软件对获得的SLCCNV广东分离物及已报道的SLCCNV分离物进行系统发育分析.采用同源重组技术,构建SLCCNV河源南瓜分离物的侵染性克隆,通过农杆菌介导注射接种南瓜子叶,测定其致病性.[结果]PCR检测结果表明,53份疑似病样中有52份感染了菜豆金色黄花叶病毒属病毒;进一步从南瓜、葫芦、冬瓜以及白瓜4种葫芦科作物病样中分别克隆获得8个SLCCNV广东分离物基因组全序列,DNA-A组分全长大小为2735—2739 nt,含有6个ORF,与已报道SLCCNV相同.DNA-B组分大小为2701—2721 nt,含有2个ORF,分别编码与病毒运动相关的蛋白BC1和BV1.序列相似性比较结果显示,广东不同分离物DNA-A组分核苷酸序列相似性在94.9％以上,与已报道的SLCCNV其他分离物的相似性在88％以上;所获得的DNA-B组分核苷酸序列相似性在86.7％以上,与已报道的SLCCNV其他分离物的相似性在83％以上.系统发育分析结果显示,8个广东分离物与来自中国广西、河南、海南、越南、泰国、菲律宾、印度尼西亚的分离物亲缘关系近,同属于一个分支,而与来自印度的分离物亲缘关系较远.致病性测定结果表明,接种后15 d(dpi),接种南瓜植株的新叶开始出现了皱缩症状;30 dpi,接种南瓜植株表现典型的曲叶病症状,PCR检测均为阳性,Western blot检测进一步验证了上述结果.[结论]在广东检测到SLCCNV侵染多种葫芦科作物,SLCCNV是引起广东南瓜曲叶病的病原.SLCCNV广东分离物与广西、海南等分离物亲缘关系近,同属于一个分支,而与来自印度的分离物亲缘关系较远.