川芎内酯抑制结肠癌细胞的生长和肿瘤干细胞样特性

• 作者: 董梁 张敬 缪柯
• 来源期刊: 广州中医药大学学报
• 学科: 医学
• 关键词: 川芎内酯 结肠癌 凋亡 线粒体膜电位 乙醛脱氢酶 SW620细胞 SW480细胞 裸鼠
• 年，卷（期）: 2021,（12）
• 所属期刊栏目: 中药药理与质量
• 页码范围: 2742-2750
• 页数: 9页
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.13359/j.cnki.gzxbtcm.2021.12.032

摘要

[目的]探讨川芎内酯对结肠癌细胞的抑制作用及其机制.[方法]①体外研究:选择SW620和SW4802种结肠癌细胞株.应用不同浓度的川芎内酯处理细胞24 h后,用细胞计数试剂盒8(CCK-8)检测细胞活力.选择浓度为0、25、50、100μmol/L的川芎内酯处理SW620和SW480细胞株,采用克隆形成实验检测增殖能力,采用流式细胞术检测癌细胞凋亡,采用蛋白免疫印迹(Western Blot)法检测细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(p21)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(Caspase-3)及裂解的Caspase-3(cleaved Caspase-3)的表达,采用流式细胞术检测线粒体膜电位的变化,按照试剂盒说明方法检测超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,应用显微镜观察SW620和SW480干细胞成球情况,采用Aldefluor分析法检测乙醛脱氢酶(ALDH)活性,采用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测干细胞标记物Nanog、八聚体结合转录因子4(OCT4)和性别决定域Y蛋白2(SOX2)的表达.②体内研究:裸鼠皮下接种SW480细胞构建荷瘤模型,加药组给予川芎内酯5 mg/kg处理,每5 d检测瘤体积.30 d后,处死祼鼠取出肿瘤称质量,脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)染色检测肿瘤组织细胞凋亡,免疫组织化学法检测肿瘤组织中p21和SOX2的表达,按照试剂盒说明方法检测肿瘤组织MDA和SOD含量.[结果]与川芎内酯0μmol/L组比较,川芎内酯50μmol/L对SW620细胞活力有明显抑制作用(P<0.05),川芎内酯25μmol/L对SW480细胞活力有明显抑制作用(P<0.05).川芎内酯明显降低结肠癌细胞存活率(P<0.05),增加细胞凋亡率(P<0.05),上调p21和cleaved Caspase-3的表达水平(P<0.05),降低线粒体膜电位,增加SOD的含量(P<0.05),减少MDA的含量(P<0.05),减小结肠癌细胞成球直径的大小(P<0.05),降低ALDH活性及Nanog、OCT4和SOX2的表达(P<0.05).体内移植实验结果显示,川芎内酯减小肿瘤体积(P<0.05),增加肿瘤组织中TUNEL阳性细胞数目(P<0.05),减少p21和SOX2阳性细胞数(P<0.05),增加SOD的含量(P<0.05),减少MDA的含量(P<0.05).[结论]川芎内酯在体内、体外均可抑制结肠癌细胞的生长,主要通过诱导氧化应激、破坏线粒体功能诱导细胞凋亡,抑制结肠癌干细胞特性阻止结肠癌发生转移.