基于nano LC-Q-Exactive-MS/MS技术分析阿胶中的蛋白多肽类物质

• 作者: 褚夏燕 孙梦茹 贾贵华 王延涛 顾建军 刘海滨 葛广波
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 阿胶 蛋白多肽类 美拉德修饰多肽 高pH反相分级 shotgun蛋白组分析
• 年，卷（期）: 2021,（24）
• 所属期刊栏目: 化学
• 页码范围: 6422-6434
• 页数: 13页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20210802.201

摘要

基于鸟枪法(shotgun)蛋白质组学分析技术对东阿阿胶成品中的蛋白多肽类物质进行系统分析.采用高pH反相色谱预分离的方法对酶解后的阿胶蛋白多肽类物质进行分级;采用Thermo Scientific EASY column预柱(100 μm×2 cm,5μm,C18)及Thermo Scientific EASY column分析柱(75 μm× 100 mm,3μm,C18)为固定相对酶解后的阿胶蛋白多肽类物质进行有效的分离,以0.1％甲酸乙腈水溶液(乙腈为84％)-0.1％甲酸水为流动相进行梯度洗脱;借助nano LC-Q-Exactive-MS/MS分析技术在正离子模式下采集阿胶多肽组的质谱数据.通过MaxQuant软件结合马属蛋白数据库、质谱数据分析及参考相关文献,从成品东阿阿胶中共分离鉴定出2291个马属肽段,同时首次从阿胶成品中发现了255个含有美拉德修饰(AML、CML、CEL)的马属肽段;并借助数据库搜寻对上述肽段的蛋白归属进行对比分析,发现所检出的肽段源于678个马属蛋白.该研究借助nano LC-Q-Exactive-MS/MS分析技术和鸟枪法蛋白质组鉴定法实现了阿胶成品中的蛋白多肽类物质快速、准确分析,为深入了解阿胶的化学物质组和效应物质提供了新的线索和关键信息.