甲基丁香酚对人肾小管上皮细胞缺氧/复氧损伤的影响及其机制研究

• 作者: 匡柏成 侯帅恒 张季 王梦琴 张佳思 孙凯伦 王志恒 李晴雯 宫念樵
• 来源期刊: 中国中药杂志
• 关键词: 甲基丁香酚 缺氧/复氧 HK-2细胞 Nrf2 Nox4
• 年，卷（期）: 2021,（24）
• 所属期刊栏目: 药理
• 页码范围: 6502-6510
• 页数: 9页
• 语种: 中文
• DOI: 10.19540/j.cnki.cjcmm.20210918.402

摘要

探讨甲基丁香酚对缺氧/复氧(hypoxia/reoxygenation,H/R)致人肾小管上皮细胞HK-2损伤的影响及机制.通过细胞计数试剂盒(cell counting kit-8,CCK-8)检测不同浓度甲基丁香酚对正常培养的及经H/R处理后的HK-2细胞活力;倒置显微镜观察甲基丁香酚对HK-2细胞形态的影响;2'-7'-二氯荧光素乙酸盐(2',7'-dichlorodihydrofluorescein diacetate,DCFH-DA)荧光染色法检测不同组细胞内活性氧含量;流式细胞术检测细胞凋亡;线粒体膜电位检测试剂盒检测线粒体膜电位的变化;Western blot法检测核转录因子E2相关因子2(nuclear factor erythroid 2 related factor 2,Nrf2)、血红素加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)、烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶4(nicotinamide adenine dinucleotide phosphatase oxidase 4,Nox4)蛋白的表达,共聚焦荧光染色检测Nrf2胞质及胞核浓度改变.结果 显示,甲基丁香酚浓度为O～40 μmol·L-1时,对HK-2细胞活性无影响;与模型组相比,甲基丁香酚可增加HK-2细胞活性,细胞形态较正常.进一步实验表明,甲基丁香酚可抑制H-/R损伤后HK-2细胞内活性氧的释放及线粒体膜电位的下降,促进Nrf2、HO-1表达及Nrf2向细胞核转位,抑制Nox4表达,进而显著降低细胞凋亡,特异性Nrf2抑制剂ML385可逆转甲基丁香酚的保护效果.初步证明甲基丁香酚对HK-2细胞H/R损伤具有明显的保护作用,机制可能与促进Nrf2/HO-1信号通路及抑制Nox4有关.该研究从抗氧化应激的角度探讨甲基丁香酚治疗肾脏缺血再灌注损伤(ischemia-reperfusion injury,IRI)、保护器官功能的可能机制,对相关中药治疗急性肾损伤的研究提供参考.