帕金森病患者血浆增强α-突触核蛋白聚集体稳定性的研究

• 作者: 彭彩霞 罗汉将 杨帆 刘承伟 陈敏
• 来源期刊: 中华神经医学杂志
• 关键词: 帕金森病 α-突触核蛋白 聚集体 消化 稳定性
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 基础研究
• 页码范围: 325-332
• 页数: 8页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn115354-20211203-00786

摘要

目的:探讨帕金森病(PD)患者血浆孵育形成的α-突触核蛋白(α-Syn)聚集体的稳定性。方法:收集自2020年6月至2020年12月于桂林医学院附属医院神经内科确诊的10例PD患者外周血液样本及同期10例健康体检人员外周血液样本，用140 μL 0.01 mol/L PBS将1 mg重组人α-Syn溶解后分别与70 μL健康人员、PD患者血浆及PBS于37 ℃环境下恒温振荡孵育7 d(依次命名为HC、PD及PBS组)；预成型原纤维(PFF)组采用10 μg α-Syn PFF用于后续实验。利用不同浓度胰蛋白酶(胰蛋白酶：α-Syn浓度比分别为1∶80、1∶40、1∶20)、不同浓度蛋白酶K(PK)(1.0、1.5、2.0 μg/mL)消化各组蛋白后采用Western blotting法检测消化前后α-Syn水平的差异。结果:(1)胰蛋白酶对PFF的消化作用：随着胰蛋白酶浓度的增加，PFF逐渐减少，当胰蛋白酶与α-Syn PFF蛋白浓度比提高至1∶20时，相对分子质量>35 000处的α-Syn聚集体基本被消化，与其他浓度组比较差异有统计学意义( P<0.05)。(2)胰蛋白酶对α-Syn聚集体的消化作用：在相对分子质量<25 000处，当胰蛋白酶与蛋白浓度比为1∶20时，与HC和PD组比较，PBS组α-Syn表达水平降低更为显著，差异有统计学意义( P<0.05)。在相对分子质量35 000~40 000处，3种胰蛋白酶浓度下3组α-Syn表达水平均明显降低；与HC和PD组相比，PBS组降低均更为显著，差异均有统计学意义( P<0.05)。在相对分子质量>40 000处，当浓度升高到1∶20时，PD组α-Syn才出现明显减少，被消化程度表现为PBS组>HC组>PD组，组间差异有统计学意义( P<0.05)。(3)PK对PFF的消化作用：当PK浓度为1.0、1.5及2.0 μg/mL时，相对分子质量>35 000处蛋白均已被基本消化，相对分子质量<25 000处α-Syn单体明显减少并出现小分子片段；与阴性对照(PK浓度为0 μg/mL)比较，差异均有统计学意义( P<0.05)。(4)PK对α-Syn聚集体的消化作用：在相对分子质量<25 000处，PBS组α-Syn单体被消化成更小的片段，而HC和PD组α-Syn单体未见明显消化，同一浓度下组间差异有统计学意义( P<0.05)。在相对分子质量35 000~40 000处，随着PK浓度增加，PBS组α-Syn二聚体被消化程度明显增加；HC组α-Syn二聚体的量随着PK浓度增加而增加；而PD组α-Syn二聚体的量随PK浓度的增加变化不明显；同一浓度下组间差异有统计学意义( P<0.05)。在相对分子质量>40 000处，随着PK浓度增加，PBS、HC及PD组α-Syn均出现一定程度减少，同一浓度下组间差异有统计学意义( P<0.05)。 结论:PD患者血浆孵育形成的α-Syn聚集体的稳定性高于HC血浆及PBS孵育形成的α-Syn聚集体。