一种快速检测乙型脑炎病毒滴度的荧光灶试验方法的建立、验证及应用

• 作者: 罗娜 乔建 姜志军 杨禅堂 张仲锴 吴杰 徐葛林
• 来源期刊: 中华微生物学和免疫学杂志
• 关键词: 乙型脑炎减毒活疫苗 多克隆抗体 荧光抗体技术 病毒蚀斑法 验证
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 所属期刊栏目: 检测技术
• 页码范围: 224-233
• 页数: 10页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn112309-20211109-00374

摘要

目的:建立快速荧光灶试验(fluorescence focus assay，FFA)滴定乙型脑炎病毒(Japanese encephalitis virus, JEV)的方法，验证该法替代病毒蚀斑法测定乙型脑炎减毒活疫苗(简称乙脑减毒活疫苗)滴度的可行性并将该法作初步应用。方法:利用原核表达方式构建JEV非结构蛋白1(non-structural protein 1，NS1)重组体系，以纯化所得的JEV-NS1蛋白免疫家兔制备抗NS1蛋白多克隆抗体，建立快速FFA测定JEV滴度的方法。通过与病毒蚀斑法作比对分析，对其专属性、准确度、精密度、线性、范围和耐用性进行验证。用经验证后的FFA检测28批乙脑减毒活疫苗，分析其应用于生产的可行性。结果:所制备的多克隆抗体与JEV可产生特异性荧光灶反应，与其他病毒(森林脑炎病毒、黄热病毒、人柯萨奇病毒A2型和A4型)无交叉反应；FFA方法学验证结果均符合乙脑减毒活疫苗的质控要求；与蚀斑法比较，FFA检测结果更趋一致。结论:本研究建立的FFA通过方法学验证，可应用于乙脑减毒活疫苗成品的滴度测定。