深海白色侧齿霉遗传转化体系建立及渗透压调控相关的EaSHO1基因功能

• 作者: 余芝 陈晓峰 姚光山 陈建明 郑华伟 王宗华
• 来源期刊: 菌物学报
• 关键词: 白色侧齿霉菌 原生质体制备及转化 EaSho1蛋白 基因敲除 高盐胁迫
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 研究论文|Research papers
• 页码范围: 226-236
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13346/j.mycosystema.210278

摘要

海洋中具有丰富的动植物及微生物资源,海洋真菌是其重要组成之一.我们前期的研究发现一株深海真菌白色侧齿霉Engyodontium album能产生具有抑菌活性的次级代谢产物engyodontiuminA,该化合物能抑制黑曲霉、金黄色葡萄球菌及创伤弧菌等病原菌的生长,是一种潜在的海洋源抗菌药物.目前,该菌遗传转化体系尚未建立,不利于开展次级代谢产物合成调控机制及其他功能基因研究.本研究成功制备了深海白色侧齿霉菌的原生质体,建立了借助聚乙二醇3350介导的原生质体转化体系,并将pCT74-sGFP载体成功导入白色侧齿霉的原生质体中,结果显示外源GFP能稳定表达.此外,为了明确白色侧齿霉菌是否能够开展基因敲除研究,通过氨基酸序列同源比对,我们选取酵母高渗甘油信号途径中的同源基因EaSHO1进行初步探究.利用同源重组的方法成功将目的 基因EaSHO1的开放阅读框(ORF)替换成潮霉素磷酸转移酶基因(HPH),由此获得EaSHO1基因敲除突变体,并对突变体进行Southern杂交验证及初步的表型分析.结果 表明,EaSHO1缺失不影响白色侧齿霉菌的营养生长及对高盐胁迫的响应,亚细胞定位结果显示EaSho1-GFP主要定位于菌丝隔膜.综上所述,本研究成功构建了一株深海白色侧齿霉菌的遗传转化体系,并借此对其基因EaSHO1进行了初步生物学功能分析.