蛋白磷酸酶4显性负性突变体介导的活性抑制改善棕榈酸诱导的肝细胞脂性凋亡

• 作者: 刘进 窦琳 陈皓 马佳睿 左慧演 徐芳芷 张曦月 满永 席超 黄秀清
• 来源期刊: 医学分子生物学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 非酒精性脂肪性肝炎 蛋白磷酸酶4 磷酸酶活性PP4RL 脂性凋亡
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 论著|Original Articles
• 页码范围: 97-104
• 页数: 8页
• 分类号: R364
• 语种: 中文
• DOI: 10.3870/j.issn.1672-8009.2022.02.001

摘要

目的 探讨抑制蛋白磷酸酶4(protein phosphatase 4,PP4)活性对肝细胞脂性凋亡的影响.方法 以400μmol/L的棕榈酸(palmitic acid,PA)处理HepG2细胞24 h建立肝细胞脂性凋亡模型;以西方饮食喂养C57BL/6J小鼠16w建立非酒精性脂肪肝炎(non-alcoholic steatohepatitis,NASH)模型;构建磷酸酶活性缺失的显性负性突变体AD-PP4RL腺病毒载体;转染AD-PP4RL至HepG2细胞腺病毒以抑制肝细胞中PP4的活性;尾静脉注射AD-PP4RL以抑制肝脏中PP4的活性;转染RAC1慢病毒至HepG2细胞中抑制RAC1的表达;BoDIPY染色检测细胞及组织中脂质蓄积情况;TUNEL染色检测细胞凋亡水平;免疫沉淀结合丝苏氨基酸磷酸酶活性检测法测定PP4活力;GTP酶活性检测试剂盒检测RAC1活性;Western印迹检测脂质代谢及脂性凋亡相关蛋白的表达水平.结果 ① 在PA处理的HepG2细胞及西方饮食喂养诱导的NASH小鼠肝脏中PP4活性升高;② 过表达磷酸酶活性缺失突变的腺病毒载体AD-PP4RL能有效抑制PP4活性;③ 抑制PP4活性降低PA诱导的HepG2细胞及NASH小鼠肝脏中脂性凋亡水平,下调脂性凋亡相关基因PUMA、Bim及c-caspase3的水平;④RAC1介导了在PP4在肝细胞脂性凋亡中的作用.结论 抑制PP4活性可以通过抑制RAC1介导的JNK信号通路的激活,改善肝细胞脂性凋亡.