Crabp2对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响

• 作者: 张虹亮 包俐 吴夏梦 李沐馨 张灿 王英 雷磊 王水莲
• 来源期刊: 中国兽医科学
• 学科: 农学
• 关键词: 猪 Crabp2 卵泡颗粒细胞 凋亡
• 年，卷（期）: 2022,（1）
• 所属期刊栏目: 基础兽医学
• 页码范围: 111-119
• 页数: 9页
• 分类号: S852.21
• 语种: 中文
• DOI: 10.16656/j.issn.1673-4696.2022.0022

摘要

为了研究胞质视黄酸结合蛋白2 (cytoplasm retinoic acid binding proteins 2,Crabp2)对猪卵泡发育的调控作用及机制,笔者通过构建猪Crabp2过表达载体并设计Crabp2 siRNA干扰片段,揭示它们对猪卵泡颗粒细胞凋亡的影响.通过从屠宰场回收猪卵巢,应用TRIzol法提取组织总RNA,并反转录成cDNA.设计Crabp2基因全长引物,利用PCR克隆Crabp2基因,构建Crabp2过表达载体.同时,设计并筛选出干扰效率最高的Crabp2 siRNA.将Crabp2过表达载体和siRNA片段分别转染至猪卵泡颗粒细胞中24 h,利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)和蛋白质免疫印迹(Western-blot)检测颗粒细胞Crabp2的表达水平,流式细胞术检测细胞凋亡率的变化,同时检测线粒体凋亡通路和死亡受体凋亡通路相关基因Bcl-2、Bax、Caspase-3、Fas及FasL的表达变化.对照组为转染pcDNA 3.1(+)空载体和siRNA阴性对照(NC)片段的卵泡颗粒细胞.结果 显示,Crabp2过表达载体转染猪卵泡颗粒细胞可使细胞Crabp2的表达极显著升高(P＜0.01),同时显著降低细胞凋亡率(P＜0.05),而细胞凋亡通路中抑凋亡基因Bcl-2的表达显著升高(P＜0.05),促凋亡基因Bax、Caspase-3、Fas极显著降低(P＜0.01),FasL显著降低(P＜0.05).与此相反,Crabp2 siRNA片段转染猪卵泡颗粒细胞可使细胞Crabp2的表达极显著降低(P＜0.01),同时显著增加细胞凋亡率(P＜0.05),而Bcl-2的表达显著降低(P＜0.05),Bax、Caspase-3和FasL极显著升高(P＜0.01),Fas显著升高(P＜0.05).结果 表明,Crabp2可能通过抑制Fas/FasL介导的死亡受体凋亡通路和线粒体凋亡通路,进而抑制猪卵泡颗粒细胞凋亡,从而参与调控猪卵泡的发育.