C端结构域截短提高苏云金芽孢杆菌来源几丁质酶的活力

• 作者: 黎欣宇 邓旭 蒋思婧 周玉玲 欧阳玉茹 贺妮莎 张桂敏
• 来源期刊: 微生物学报
• 关键词: 苏云金芽胞杆菌 几丁质酶 蛋白质结构域工程 酶活力
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 研究报告|RESEARCH ARTICLES
• 页码范围: 1379-1389
• 页数: 11页
• 语种: 中文
• DOI: 10.13343/j.cnki.wsxb.20210422

摘要

[目的]尝试利用蛋白质结构域工程的手段优化苏云金芽胞杆菌(Bacillus thuringiensis BMB 171)来源的几丁质酶BtChiA的酶活力,并对水解胶体几丁质的产物进行定性和定量分析.[方法]根据BtChiA的序列分析其结构域的组成,构建BtChiA及部分结构域缺失的突变体蛋白在大肠杆菌中的表达菌株并进行蛋白的表达纯化;利用HPLC分析几丁质酶水解产物的类型及含量.[结果]异源表达纯化获得了纯度90％以上,大小正确的BtChiA(全长蛋白)和BtChiA△50(截短几丁质结合结构域CBD和纤连蛋白结构域FnⅢ).BtChiA△50水解胶体几丁质的活力是BtChiA的1.64倍.两者水解胶体几丁质的产物均为几丁单糖GlcNAc和几丁二糖(GlcNAc)2,全长蛋白BtChiA的水解产物中(GlcNAc)2的含量是GlcNAc的0.97倍,BtChiA△50水解产物中(GlcNAc)2的含量是GlcNAc的1.79倍.[结论]利用蛋白质结构域工程构建了水解活性提高的BtChiA△50突变体、优化了水解产物的组成.