YAP在特发性膜性肾病中的表达及其对C5 b-9诱导足细胞损伤的作用

• 作者: 史添立 罗贞 焦石
• 来源期刊: 中国比较医学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 特发性膜性肾病 转录共激活因子Yes相关蛋白 膜攻击复合物C5b-9 足细胞
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 所属期刊栏目: 研究报告
• 页码范围: 1-8
• 页数: 8页
• 分类号: R-33
• 语种: 中文
• DOI: 10.3969/j.issn.1671-7856.2022.03.001

摘要

目的 在特发性膜性肾病(IMN)中探究转录共激活因子Yes相关蛋白(YAP)的表达及其在膜攻击复合物C5b-9诱导足细胞损伤的作用.方法 免疫组织化学染色检测YAP蛋白在IMN患者肾组织及正常对照肾组织中的表达;选用亚溶解剂量的膜攻击复合物C5b-9(以下简称C5b-9)在体外建立人足细胞系MPC5的损伤模型,Western blot检测随C5b-9刺激时间的延长,足细胞中YAP蛋白的表达变化;使用siRNA瞬时转染技术,靶向沉默足细胞中YAP基因表达,qRT-PCR及Western blot检测转染效率;按足细胞处理的不同将其分为4组,正常培养的Control组,经C5b-9处理的C5b-9组,C5b-9处理转染si-NC或si-YAP的的C5b-9+si-NC组与C5b-9+si-YAP组;应用CCK-8实验检测上述各组细胞的增殖活力,Anenxin V-FITC双染色联合流式细胞数检测各组细胞的凋亡发生率,DCFH-DA法检测细胞中活性氧(ROS)含量,Western blot检测各组细胞中足细胞标志性蛋白Nephrin、WT1与紧密连接蛋白ZO-1、表型转换蛋白Snail及纤连蛋白Fibronectin的蛋白表达水平.结果 与正常对照肾组织相比,YAP在IMN中的表达显著增加(P<0.05);随C5b-9刺激时间的延长,足细胞中YAP蛋白的表达水平逐渐升高;转染si-YAP后,足细胞中YAP mRNA及蛋白水平均显著降低(P<0.05);与Control组相比,C5b-9组、C5b-9+si-NC组及C5b-9+si-YAP组细胞的增殖活力均显著降低(P<0.05),而凋亡率及ROS含量均显著增加(P<0.05);但与C5b-9组或C5b-9+si-NC组相比,C5b-9+si-YAP组细胞增殖活力显著增加(P<0.05),凋亡率及ROS含量显著减少(P<0.05);Western blot检测各组细胞中相关蛋白的表达结果显示,与Control组相比,C5b-9组、C5b-9+si-NC组及C5b-9+si-YAP组细胞中Nephrin、WT1及ZO-1蛋白表达均显著降低(P<0.05),Snail与Fibronectin蛋白表达均显著增加(P<0.05);而与C5b-9组或C5b-9+si-NC组相比,C5b-9+si-YAP组细胞中Nephrin、WT1及ZO-1蛋白表达显著增加(P<0.05),而Snail与Fibronectin蛋白表达显著减少(P<0.05).结论 本研究结果表明YAP蛋白在IMN患者肾小球中的表达显著增加,而沉默足细胞中YAP基因表达能够明显改善C5b-9诱导的细胞功能损伤,并抑制其凋亡的发生.