基于Wnt信号通路研究表没食子酸儿茶素没食子酸酯对肝星状细胞活化的作用及机制

• 作者: 石明亮 王晓磊 李江琳 段文飞
• 来源期刊: 中草药
• 学科: 医学
• 关键词: 表没食子酸儿茶素没食子酸酯 肝星状细胞 凋亡 Wnt信号通路 小窝蛋白-1
• 年，卷（期）: 2022,（3）
• 所属期刊栏目: 药理与临床|Pharmacological Studies and Clinical Observations
• 页码范围: 758-766
• 页数: 9页
• 分类号: R285.5
• 语种: 中文
• DOI: 10.7501/j.issn.0253-2670.2022.03.015

摘要

目的 基于Wnt信号通路探究表没食子酸儿茶素没食子酸酯(epigallocatechin gallate,EGCG)对人肝星状细胞LX-2活化的影响及其作用机制.方法 体外培养LX-2细胞,CCK-8法筛选EGCG的实验浓度;取对数生长期的LX-2细胞,设置对照组(正常培养)、模型组[10ng/mL转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1,TGF-β1)]、EGCG低剂量组(12.5μmol/L EGCG+ 10 ng/mL TGF-β1)、EGCG高齐量组(25.0 μmol/L EGCG+ 10 ng/mL TGF-β1)、EGCG+siRNA-NC组[小窝蛋白-1(Caveolin-1,Cav-1)-siRNA阴性对照+25.0 μmol/L EGCG+TGF-β1]和EGCG+ Cav-1-siRNA组(Cav-1-siRNA+25.0μmol/L EGCG+TGF-β1),CCK-8法检测各组细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率和细胞周期分布情况;吖啶橙/溴乙锭(AO/EB)染色法观察细胞凋亡形态;qRT-PCR法检测细胞α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin,α-SMA)、I型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)和基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(tissue inhibitors of matrix metalloproteinase-1,TIMP-1)mRNA表达情况;Western blotting检测细胞Cav-1和Wnt信号通路相关蛋白表达情况.结果 EGCG降低LX-2细胞存活率,呈剂量相关性.与对照组相比,模型组LX-2细胞存活率、S期和G2/M期的细胞比例、细胞α-SMA、Collagen Ⅰ、TIMP-Ⅰ mRNA表达和Wntl、Wnt5a、β-连环蛋白(β-catenin)、细胞周期蛋白Cyclin D1、原癌基因c-Myc蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05),细胞凋亡率、G0/G1期的细胞比例、凋亡细胞比例、Cav-1蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05);与模型组相比,EGCG低、高剂量组LX-2细胞存活率、S期和G2/M期的细胞比例、细胞α-SMA、Collagen Ⅰ、TIMP-1 mRNA表达和Wnt1、Wnt5a、β-catenin、Cyclin D1、c-Myc蛋白表达水平均显著降低(P＜0.05),细胞凋亡率、G0/G1期的细胞比例、凋亡细胞比例、Cav-1蛋白表达水平均显著升高(P＜0.05);且在EGCG干预的基础上,沉默Cav-1的表达可显著上调Wnt1、Wnt5a蛋白表达,减弱EGCG对Wnt信号通路的抑制作用.结论 EGCG可能通过上调Cav-1表达,抑制Wnt信号通路激活,进而抑制LX-2细胞活化.