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摘要:
目的:探讨微小RNA-92a-3p (micro RNA-92a-3p, miR-92a-3p)靶向调控PTEN对神经母细胞瘤(neuroblastoma,NB)细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:采用miR-92a-3p mimics及其抑制基因(inhibitor)分别转染至SH-SY5Y细胞,根据实验需要分为miR-92a-3p过表达组、NC过表达组、miR-92a-3p抑制组、NC抑制组,采用实时荧光定量聚合酶链反应(real time fluorescent quantitative polymerase chain reaction,qRT-PCR)检测转染后细胞内miR-92a-3p的表达水平;采用CCK-8检测实验、细胞克隆形成实验、细胞划痕实验、细胞侵袭实验检测miR-92a-3p对细胞增殖、侵袭和迁移能力的变化;采用基因软件预测miR-92a-3p的靶基因并用双荧光素酶报告体系进行验证;最后采用qRT-PCR和蛋白质印迹法检测过表达miR-92a-3p和抑制miR-92a-3p后对PTEN/PI3K/AKT信号通路相关分子的表达情况。结果:qRT-PCR结果显示miR-92a-3p过表达组的表达含量(65.73±20.07)比miR-92a-3p抑制组的表达含量(0.33±0.02)显著增高,且差异有统计学意义( t=5.64, P=0.005)。CCK-8检测实验显示,miR-92a-3p过表达组能促进SH-SY5Y细胞的增殖活性( P均<0.001 ),miR- 92a-3p抑制组则能有效抑制SH-SY5Y细胞的增殖活性( P=0.031, P=0.012, P<0.001, P<0.001)。细胞克隆形成实验结果显示,miR-92a-3p过表达组的细胞克隆数为(210±19)个,高于NC过表达组的细胞克隆数(144±5)个,组间比较差异有统计学意义( P=0.005);miR-92a-3p抑制组的细胞克隆数为(83±6)个,低于NC抑制组的细胞克隆数(137±13)个,组间比较差异有统计学意义( P=0.003)。细胞划痕实验及细胞侵袭实验结果显示,miR-92a-3p过表达组细胞迁移愈合率为(90.37±0.67)%,高于miR-92a-3p抑制组(41.03±0.56)%,组间比较差异有统计学意义( P<0.001);miR-92a-3p过表达组细胞穿膜数量为(106.80±9.28)个,高于miR-92a-3p抑制组(33.40±7.56)个,组间比较差异有统计学意义( P<0.001)。qRT-PCR和蛋白质印迹法结果显示,与NC过表达组相比,miR-92a-3p过表达组PTEN的mRNA表达量(0.43±0.02)和蛋白水平明显降低,而PI3K mRNA表达量(2.00±0.10)、AKT mRNA表达量(1.41±0.19)和各自蛋白水平明显升高,且差异均有统计学意义( P<0.001、 P< 0.001和 P=0.028);miRNA-92a-3p抑制组可逆转上述作用,且差异均有统计学意义( P=0.043、 P= 0.046和 P<0.001)。 结论:PTEN基因是miR-92a-3p的靶基因,miR-92a-3p可能通过促进NB细胞增殖、促进NB细胞侵袭、促进NB细胞迁移和抑制PTEN mRNA表达引发PTEN蛋白水平的降低。
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文献信息
篇名 miR-92a-3p靶向调控PTEN对神经母细胞瘤细胞增殖、侵袭和迁移的影响
来源期刊 中华小儿外科杂志 学科
关键词 微RNAs 神经母细胞瘤 细胞增殖
年,卷(期) 2022,(3) 所属期刊栏目 实验研究
研究方向 页码范围 257-264
页数 8页 分类号
字数 语种 中文
DOI 10.3760/cma.j.cn421158-20201106-00691
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中华小儿外科杂志
月刊
0253-3006
42-1158/R
大16开
武汉市胜利街155号
38-19
1980
chi
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