细菌外膜囊泡肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8 + T细胞浸润的影响

• 作者: 陈志强 马娜娜 赵潇 高松 郝继辉
• 来源期刊: 中华消化外科杂志
• 关键词: 胰腺肿瘤 细菌外膜囊泡 肿瘤疫苗 免疫治疗 动物模型 治疗效果
• 年，卷（期）: 2022,（4）
• 所属期刊栏目: 论著
• 页码范围: 530-536
• 页数: 7页
• 语种: 中文
• DOI: 10.3760/cma.j.cn115610-20220215-00087

摘要

目的:探讨细菌外膜囊泡（OMVs）肿瘤疫苗对胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖和CD8 + T细胞浸润的影响。 方法:采用实验研究方法。采用卵清蛋白（OVA）慢病毒载体质粒pLV-EF1a-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro构建小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞；采用大肠杆菌来源ClyA-Catchers-OMVs（CC-OMVs）与标签化抗原肽SpyTag-OVA制备OMVs肿瘤疫苗；应用OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠CD8 + T细胞生成，采用体外细胞杀伤实验（OMVs肿瘤疫苗刺激T细胞组和对照T细胞组）、小鼠皮下胰腺癌成瘤模型（OMVs肿瘤疫苗组和对照组）和免疫组织化学染色检测分析OMVs肿瘤疫苗抑制胰腺癌细胞增殖，刺激CD8 + T细胞浸润的效果。观察指标：（1）小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞鉴定情况。（2）CC-OMVs形态观察情况。（3）OMVs肿瘤疫苗特异性T细胞对小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞增殖抑制情况。（4）OMVs肿瘤疫苗对小鼠胰腺癌的抑制情况。（5）OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠胰腺癌组织CD8 + T细胞浸润情况。正态分布的计量资料以 x±s表示，组间比较采用 t检验。计数资料以绝对数或百分率表示。 结果:（1）小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞鉴定情况。激光共聚焦检测结果显示：感染OVA慢病毒载体质粒pLV-EF1a-hluc-P2A-mNeongreen-CMV-OVA-3Xflag-P2A-puro的小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞表达mNeongreen绿色荧光。流式细胞检测结果显示：以小鼠胰腺癌Pan02细胞为参照，Pan02-OVA细胞Flag蛋白表达率为90.7%。（2）CC-OMVs形态观察情况。透射电子显微镜检测结果显示：CC-OMVs呈均匀球形，直径<50 nm。（3）OMVs肿瘤疫苗特异性T细胞对小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞增殖抑制情况。细胞增殖毒性检测结果显示：OMVs肿瘤疫苗刺激T细胞组小鼠胰腺癌Pan02-OVA细胞450 nm吸光度为0.41±0.12，对照T细胞组为1.05±0.15，两组比较，差异有统计学意义（ t=9.54， P<0.05）。（4）OMVs肿瘤疫苗对小鼠胰腺癌的抑制情况。OMVs肿瘤疫苗组小鼠背部皮下肿瘤组织质量为（81±10）g，对照组为（153±17）g，两组比较，差异有统计学意义（ t=8.26， P<0.05）。（5）OMVs肿瘤疫苗刺激小鼠胰腺癌组织CD8 + T细胞浸润情况。免疫组织化学染色检测结果显示：OMVs肿瘤疫苗组小鼠背部皮下肿瘤组织中CD8 + T细胞染色数目为（28.7±3.5）个，对照组为（9.3±1.5）个，两组比较，差异有统计学意义（ t=8.74， P<0.05）。 结论:细菌OMVs肿瘤疫苗可抑制胰腺癌小鼠肿瘤细胞增殖并提高肿瘤组织中CD8 + T细胞浸润数目。