益肾通络方对MN大鼠miR-514a-5p/TNFSF15信号通路的影响及机制

• 作者: 毛竞宇 高飞 张欣欣 刘昊 赵美姣 陈素枝 杨凤文 檀淼 檀金川
• 来源期刊: 中国实验方剂学杂志
• 学科: 医学
• 关键词: 膜性肾病 益肾通络方 足细胞 miR-514a-5p TNFSF15
• 年，卷（期）: 2022,（2）
• 所属期刊栏目: 药理
• 页码范围: 121-130
• 页数: 10页
• 分类号: R2-0|R22|R285.5|R289|R33
• 语种: 中文
• DOI: 10.13422/j.cnki.syfjx.20212407

摘要

目的:基于miR-514a-5p/肿瘤坏死因子超家族成员15(TNFSF15)信号通路探讨益肾通络方抑制膜性肾病(MN)大鼠肾小球足细胞凋亡的分子机制.方法:80只SD大鼠采用预免疫和尾静脉注射阳离子化牛血清白蛋白(C-BSA)的方法建立MN大鼠模型,并使造模成功的MN大鼠随机分为模型组,益肾通络方高、中、低剂量组(26.44,13.22,6.61 g·kg-1)和贝那普利组(10mg·kg-1),每组各10只,取健康大鼠20只作为正常组,各组分别予对应药物灌胃,每日1次,连续干预4周.给药结束后,实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测大鼠肾组织中miR-514a-5p及TNFSF15 mRNA表达水平;免疫组化(IHC)检测大鼠肾组织中足细胞标志蛋白足细胞裂孔膜蛋白(Nephrin),膜蛋白(Podocin),足萼蛋白(Podocalyxin),突触足蛋白(Synaptopodin),TNFSF15及足细胞凋亡相关蛋白B细胞淋巴瘤-2(Bcl-2)相关X蛋白(Bax),Bcl-2关联死亡启动子重组蛋白(BAD),大分子B细胞淋巴瘤(Bcl-XL)的表达水平;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测大鼠肾组织中TNFSF 15,Bax,BAD,Bcl-2,Bcl-XL的表达水平;原位末端标记法(TUNNEL)检测大鼠肾组织细胞凋亡率.结果:与正常组比较,模型组大鼠肾组织中miR-514a-5p水平明显降低(P＜0.05),TNFSF15 mRNA水平明显升高(P＜0.05);足细胞标志蛋白Nephrin,Podocin,Podocalyxin,Synaptopodin表达明显降低(P＜0.05);TNFSF15,Bax,BAD蛋白表达水平明显升高(P＜0.05),Bcl-2,Bcl-XL蛋白表达水平明显降低(P＜0.05);凋亡细胞明显增多(P＜0.05).与模型组比较,益肾通络方各剂量组和贝那普利大鼠肾组织中miR-514a-5p水平明显升高(P＜0.05),TNFSF15 mRNA水平明显降低(P＜0.05);足细胞标志蛋白Nephrin,Podocin,Podocalyxin,Synaptopodin表达明显升高(P＜0.05);TNFSF15,Bax,BAD蛋白表达水平明显降低(P＜0.05),Bcl-2,Bcl-XL蛋白表达水平明显升高(P＜0.05);凋亡细胞明显减少(P＜0.05).结论:益肾通络方可能通过miR-514a-5p/TNFSF 15信号通路,减轻大鼠肾组织足细胞凋亡,缓解MN大鼠肾损伤.