LM-Exos对巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的调节作用

• 作者: 焦健 李能秀 左雨霏 马忠梅 常意行 张石磊 孟庆玲 才学鹏 乔军 .石河子大学动物科技学院 .中国兽医药品监察所
• 来源期刊: 南方农业学报
• 关键词: 单核细胞增多性李斯特菌;外泌体;巨噬细胞;CD8+T淋巴细胞
• 年，卷（期）: 2024,（12）
• 所属期刊栏目: 畜牧·兽医·水产·蚕桑
• 页码范围: 238-247
• 页数: 10页
• 语种: 中文

摘要

【目的】分离感染单核细胞增多性李斯特菌（Listeria monocytogenes,LM）RAW264.7巨噬细胞分泌的外泌体（Exosomes,Exos），探究其对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的调节作用及机制，为揭示LM感染、胞内生存及免疫逃逸机制提供理论参考。【方法】通过差异超速离心法结合分子排阻法提取感染LM后RAW264.7巨噬细胞外泌体（LM-Exos），利用透射电子显微镜、粒径分析仪和Western blotting鉴定LM-Exo表型。通过实时荧光定量PCR、细胞活力检测和ELISA等方法分析不同剂量LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞的调节作用。【结果】LM-Exos具有双层膜结构类圆形的小囊泡，直径约为60～80nm。Westernblotting检测结果显示，LM-Exos表面含有CD9、CD63、TSG101特异性标记蛋白。LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞形态和功能的影响具有明显的浓度依赖性，随着LM-Exos刺激时间延长，细胞形态由圆形逐渐分化为长梭形，并伸出不同形态的伪足。实时荧光定量PCR结果显示，随着LM-Exos刺激浓度的增加，IL-1β、IL-10、IL-6和TNF-α基因相对表达量均呈升高趋势。高浓度LM-Exos刺激后，RAW264.7巨噬细胞活力略有下降但抗LM EGD-e能力增强。与低浓度LM-Exos刺激相比，高浓度LM-Exos刺激显著（P<0.05）或极显著（P<0.01）提高了CD8+T淋巴细胞TNF-α和IL-10相对分泌水平，并诱导了CD8+T细胞形态变化及凋亡水平升高。【结论】不同剂量的LM-Exos对RAW264.7巨噬细胞和CD8+T淋巴细胞表现出不同的调控作用。LM-Exos能增强RAW264.7巨噬细胞抗LM EGD-e能力，同时也能诱导CD8+T淋巴细胞分化和凋亡。LM-Exos可以作为免疫激活剂，增强RAW264.7巨噬细胞的免疫功能，高剂量的LM-Exos可能会通过诱导T细胞凋亡来减弱机体的免疫应答，进而实现LM免疫逃逸，这种双重作用可能是LM在感染过程中实现免疫逃逸的重要机制。