摘要:

目的 采用改良方法构建组织工程小肠,初步从形态学上研究小肠肌层发育,探讨完善构建的条件.方法 实验分4组:A组,空白管样多聚体支架植入近交系wistar大鼠体内,共4例,植入后第3、4周取材;8组,非改良方法分离小肠上皮类器官单位(Intestinal epithelium organoid units, IOUs)与多聚体支架复合植入大鼠体内,共4例,植入后第3、4周取材:C组,改良方法分离IOUs与多聚体支架复合植入大鼠体内,共8例,植入后第3、4、7、11周取材;D组,改良方法分离IOUs与细胞外基质胶(ECM胶)复合物注入裸鼠背部(每只注射4例,3例为复合物,1例为空白ECM胶注入),共16例.植入后第1、2.3、7周取材.取材后均行组织学、免疫组化染色进行组织形态学分析.结果 改良方法分离IOUs构建的囊样小肠肠壁仅能见到类粘膜肌层发育,未见到典型的固有肌层发育.非改良方法可以见到团块样聚集的类固有肌层发育.空白支架植入未见小肠细胞发育.结论 利用组织工程小肠模型研究大鼠肠道重构发育是一个较好的方法,粘膜肌层的重构可以不依赖环肌层和纵肌层肌细胞的存在.

摘要:

目的 采用机械分离和酶消化相结合的方法分离小肠上皮类器官单位(IOUs),并进行形态及功能鉴定,建立稳定的分离培养技术.方法 采用机械法剪碎小肠组织,中性蛋白酶和胶原酶联合消化分离组织碎片,差速沉淀法获得IOUs,通过相差显微镜观察IOUs形态,组织学、免疫组化证实其增殖特性及上皮刷状缘完整性,原代二维培养观察IOUs体外增殖及细胞群体组成.结果 分离的IOUs大部分形态完整,PAS染色显示连续的刷状缘,并可见杯状细胞,PCNA染色阳性并呈梯度改变,IOUs体外培养可见构成小肠的各胚层细胞.结论 采用机械分离和酶消化相结合的方法可以得到形态完整、增殖活跃的IOUs,有望为组织工程小肠构建提供种子细胞.