摘要:

通过活性酯与碳二亚胺联合法或混合酸酐法将5-甲基水杨酸与牛血清白蛋白偶联制得偶联比分别为14.6和3.4的免疫原(简称1和2).用1和2分别免疫雄性新西兰大白兔得到两种多克隆抗体(简称3和4).用间接竞争ELISA测得3和4的抗体效价分别为1:256000与1∶128 000.用3建立了测定5-甲基水杨酸的间接竞争ELISA法.该方法的IC50为149.04 ng·mL-1,最低检测限为4.19 ng·mL-1;3与苯酚、对甲酚和邻氨基四甲基苯酚的交叉反应率均＜0.1％.

摘要:

目的:制备三价铬离子螯合物单克隆抗体(Cr3+-EDTA mAb),研制胶体金免疫层析试纸条(Cr-Strip).方法:用异硫氰酯法合成Cr3+-iEDTA-BSA,UV和ICP-AES进行鉴定;细胞融合技术筛选Cr3+-EDTA mAb细胞株,体内诱生腹水法制备Cr3+-EDTA mAb,并对其特性进行分析;应用Cr3-EDTA mAb研制Cr-Strip,并测定其性能.结果:筛选出3株杂交瘤,最好的是2A11G5,Ka为2.69×109 L/mol,对Cr3+-EDTA的IC50为9.84 μg/L,与其他重金属离子无交叉反应;Cr-Strip的检测时间为10 min,检测限为5μg/L,其检测结果与ICP-AES符合率为100％.结论:制备出了质量的Cr3+-EDTA mAb,研制出更为灵敏的Cr-Strip.

摘要:

[目的]从牛脑中分离纯化钙调素(CaM),并进行生化鉴定,同时用碳二亚胺法制备CaM偶联免疫原.[方法]以phenyl-Sepharose层析法从牛脑中分离纯化CaM,用PDE法检测其活性,以SDS-PAGE、PAGE检测其分子量并观察CaM有无Ca~(2+)结合时的电泳行为,检测其紫外扫描光谱,同时用交联剂碳二亚胺制备CaM偶联抗原进行动物免疫,并用间接Elisa法检测动物血清免疫效价.[结果]纯化后的CaM对PDE有明显的激活作用,电泳结果显示为均一条带,分子量约为17.3 kDa,在SDS-PAGE中,CaM结合Ca~(2+)时比未结合Ca2+时迁移率快;而在PAGE中,迁移率在结合Ca~(2+)比未结合Ca~(2+)时慢;紫外光谱扫描显示约在251、260、267、272 和283 nm有5个吸收峰,动物血清免疫效价为1∶800.[结论]用phenyl-Sepharose层析法纯化CaM和用碳二亚胺法制备CaM偶联抗原是成功的.

摘要:

为建立氯霉素的免疫分析方法,采用混合酸酐法和重氮化法,将半抗原氨霉素(CAP)与载体牛血清白蛋白(BSA)及卵清蛋白(OVA)偶联制备免疫抗原CAP-BSA和包被抗原CAP-OVA.以紫外扫描确定偶联率,并用酶联免疫(ELISA)的方法鉴定,确定偶联成功.经过比较,混合酸酐法优于重氮化法.

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19-去甲睾酮(19-nortestosterone NT),属于半抗原生物小分子,具有免疫反应性,但不具有免疫原性.本文中19-去甲睾酮经羧甲基羟胺肟化,质谱(MS)检验后,采用混合酸酐法将肟化产物与牛血清蛋白(bovine serum albumin BSA)偶联,紫外分光光度法测定其交联率为24.用此合成产物进行动物体免疫,获得了NT的多克隆抗体.经间接酶联免疫测定,其抗血清的稀释度可以达到1:102400,证明诺龙免疫原的合成成功,为诺龙酶联免疫试剂盒的研究奠定基础.

摘要:

目的观察单、双性日本血吸虫感染小鼠后Th1/Th2细胞因子水平的动态变化,探讨日本血吸虫不同免疫原对Th1/Th2免疫偏移的影响及与虫卵肉芽肿形成的相关性.方法用ELISA夹心法检测单、双性日本血吸虫感染小鼠及单性感染8w双性再感染0～12w,小鼠脾淋巴细胞培养上清Th1细胞因子IL-2、IFN-γ和Th2细胞因子IL-4表达水平.结果单性感染小鼠6～12w在脾淋巴细胞培养上清中可测出一定量的IL-2和IFN-γ,但无明显动态变化,而IL-4未能测出;双性感染小鼠IL-2和IFN-γ在感染后4～6w开始上升,8w达高峰,随后下降,IL-4则在感染后8w时迅速上升且随着感染时间延长而明显升高,单性感染8w双性再感染4w时,小鼠脾淋巴细胞培养上清IL-2、IFN-γ和IL-4表达水平即迅速升高且在双性再感染8～12w逐渐增强.结论日本血吸虫不同免疫原对Th1/Th2免疫偏移的影响作用不同,Th1优势应答可能主要由虫体抗原诱导,Th2优势应答可能主要由虫卵抗原(SEA)所诱导,后者是诱导宿主产生免疫病理反应的主要因素.

摘要:

本实验对地塞米松、倍他米松、双氟米松琥珀酸酐化,然后分别与牛血清白蛋白、卵清蛋白偶联,制备三种免疫原和包被原.采用紫外分光光度法来估算几种偶联复合物的偶联比,免疫原的偶联比分别为DEX-BSA:11、BET-BSA:23、FLM-BSA:17.

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目的 为获得高效价的马血浆,选择最佳E型肉毒类毒素免疫原配制比例.方法 用3种不同配制比例配制E型肉毒类毒素免疫原,免疫原1、2、3分别为V(羊毛脂)∶V(液体石蜡)∶V(精制E型肉毒类毒素抗原)=1∶2∶6,1∶2∶3,1∶2∶2.将24匹马分为3组,分别用3种免疫原按常规法免疫,采用小鼠中和试验方法检测马血浆效价.结果 用免疫原2免疫的马匹,马血浆平均效价比用免疫原1、3平均效价提高了36.3%,且马匹表现状况好于免疫原1、3.结论 免疫原2的配制比例使用安全、稳定性良好、马匹免疫效果较好,为目前抗毒素生产用免疫原最佳配制比例.

摘要:

莱克多巴胺是一种禁用β-兴奋剂,建立莱克多巴胺药残的快速检测方法是实现对其进行有力监控的有效途径,而莱克多巴胺抗体是快速免疫检测泫的基本试剂.本实验用全新的方法研究了莱克多巴胺免疫原的合成,采用对氨基苯甲酸(ABA)和1,4-丁二醇缩水甘油醚(BDE)将莱克多巴胺分别和cBSA、cOVA偶联,合成了莱克多巴胺的免疫原和包被抗原,并对其进行了紫外分析.用免疫原免疫新西兰大白兔,获得了高灵敏度和特异性的莱克多巴胺多克隆抗体,采用间接ELISA法检测抗体的IC50值为4.34ng/ml,所得多克隆抗体效价达到102400.

摘要:

目的 探讨检验血清IgE、细胞结合IgE水平在过敏性疾病临床诊断中的意义.方法 以2018年7月～2019年7月于本院进行变态反应性疾病诊断和治疗的96例患者作为观察组,另将同期健康体检人员50例作为对组照,探讨观察组患者过敏原特异性IgE种类,比较两组血清IgE与细胞结合IgE水平,以及标本室温下放置48h和96h时两组血清IgE与细胞结合IgE水平.结果观察组患者存在1种过敏原阳性者13例(13.54％),2种过敏原阳性53例(55.21％),3种及以上者30例(31.25％).其中因食物引起过敏者67例,多为海鲜和高蛋白食品;因吸入引起过敏者82例,多为尘螨、花粉和霉菌;观察组血清IgE和细胞结合IgE水平明显高于对照组(P<0.001),观察组细胞结合IgE水平明显高于血清IgE(P<0.001);经过48h和96h的放置后,血清IgE与细胞结合IgE水平明显降低,且放置时间越长,影响越大.结论 血清 IgE 水平和细胞结合IgE水平检测均可作为过敏性疾病的临床诊断指标,但临床检查时应注意,二者指标水平会因样品放置时间延长而降低影响结果.