摘要:

目的：探讨冬凌草甲素在体外联合吉西他滨对胰腺癌细胞株SW1990抑制作用及其可能机制。方法不同浓度的冬凌草甲素（0、10、20、40、80、160μmol/L）作用胰腺癌SW1990细胞24、48、72 h后，CCK-8法检测胰腺癌细胞株SW1990细胞的增殖作用；冬凌草甲素（40μmol/L）与吉西他滨（20μmol/L）单独及联合处理细胞48 h，并设立对照组, CCK-8法检测SW1990细胞的存活率；Annexin V-FITC/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡情况；RT-PCR检测SW1990细胞中NF-κB和XIAP基因的表达水平。结果冬凌草甲素对胰腺癌SW1990细胞的增殖抑制作用呈明显的剂量与时间依赖性；与其他各组相比，冬凌草甲素联合吉西他滨组细胞存活率明显降低（P<0.05），凋亡率显著升高（P<0.05）；另外，联合组明显下调胰腺癌细胞中NF-κB和XIAP表达水平（P<0.05）。结论冬凌草甲素在体外能显著增强吉西他滨对胰腺癌SW1990细胞的抗瘤效果，其机制可能是通过下调NF-κB及其下游XIAP的表达，进而诱导胰腺癌细胞的凋亡而实现。

摘要:

目的：探讨天然产物衍生物冬凌草甲素对人肺癌细胞体外侵袭的抑制作用及其机制。方法冬凌草甲素处理人肺癌细胞系A549和PC-9后，应用细胞增殖实验（MTS）法检测肿瘤细胞生长，Transwell试验检测肿瘤侵袭能力，黏附试验检测肿瘤黏附能力，流式细胞术检测肿瘤细胞周期，Western blotting和Realtime-PCR检测细胞周期蛋白依赖性激酶1（CDK1）、雷帕霉素靶蛋白（mTOR）、p53、p21、E-钙黏素（E-cadherin）、CD44、β-catenin、尿激酶型纤溶酶原激活物（uPA）、基质金属蛋白酶（MMP）-2/9、p-AKT和磷酸化酪氨酸激酶（p-Src）表达，报告基因技术考察核因子（NF）-κB转录活性。结果冬凌草甲素显著抑制A549和PC-9细胞的体外增殖、黏附和侵袭，将细胞周期阻滞在G2/M期，冬凌草甲素促进E-cadherin、p53和p21的表达，下调CDK1、mTOR、CD44、β-catenin、uPA、MMP-2/9、p-AKT和p-Src表达和NF-κB转录活性。结论冬凌草甲素可抑制人肺癌细胞系A549和PC-9的体外侵袭能力，可能与其调节酪氨酸激酶活性有关。

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目的:探讨冬凌草甲素对体内外卵巢癌生长的影响及其作用机制.方法:冬凌草甲素作用人卵巢癌细胞株HO-8910PM后,MTT法检测细胞增殖；流式细胞术检测细胞凋亡；Western blot检测卵巢癌细胞中核因子(NF)-KB和X连锁凋亡抑制蛋白(XIAP)表达；建立起裸鼠卵巢癌皮下移植瘤模型,观察冬凌草甲素对裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长的影响；免疫组织化学法检测肿瘤组织中Ki-67、NF-κB和XIAP的阳性表达.结果:HO-8910PM细胞经不同浓度冬凌草甲素(10、20、40 μmol· L-1)作用24h后,细胞存活率分别为(80.14±9.84)％、(71.68±6.51)％和(64.58±5.24)％,均低于对照组(96.12±4.23)％,差异有统计学意义(P＜0.05).冬凌草甲素(40 μmol·L-1)作用HO-8910PM细胞24 h后,诱导(15.9±3.4)％的HO-8910PM细胞发生早期凋亡,高于对照组的(1.7±0.3)％,差异有统计学意义.3种浓度(10、20、40 μmol·L-1)的冬凌草甲素作用24h,均可抑制HO-8910PM细胞中NF-κB的表达；而低浓度(10μmol·L-1)冬凌草甲素对HO-8910PM细胞中XIAP蛋白无明显抑制作用,高浓度冬凌草甲素(20和40 μmol·L-1)明显抑制XIAP蛋白的表达.冬凌草甲素可显著抑制裸鼠卵巢癌皮下移植瘤生长,实验组中Ki-67、NF-κB和XIAP的表达强度均低于对照组(P＜0.01).结论:冬凌草甲素可显著抑制体内外卵巢癌的生长,该作用机制可能是冬凌草甲素通过抑制NF-κB及其调控蛋白XIAP的表达来抑制卵巢癌的生长.

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目的：探讨冬凌草甲素对急性单核细胞白血病细胞株THP-1的抗白血病效应及其作用机制。方法以急性单核细胞白血病细胞株THP-1为研究对象,应用改良四甲基偶氮唑盐法测定4、6、8μmol/L浓度冬凌草甲素处理72 h后THP-1细胞的增殖抑制率,以及计算2、4、6、8、10μmol/L冬凌草甲素处理24、72、120 h后的细胞生存率并绘制生长曲线；显微镜下观察4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞的形态学变化；采用流式细胞术检测0、4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理24 h后THP-1细胞凋亡率；采用Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞0、12、24 h后Akt/mTOR、Raf/MEK/ERK细胞信号转导通路的变化,以及凋亡调节蛋白Bcl-2和Bax的变化。结果①4、6、8μmol/L冬凌草甲素处理72 h后细胞增殖抑制率分别为(20.02±11.15)%、(45.99±12.76)%、(86．39±9.18)%,与4μmol/L冬凌草甲素比较,6、8μmol/L冬凌草甲素处理后细胞增殖抑制率均升高,差异均有统计学意义(P<0．05或P<0．01)；冬凌草甲素处理72 h后细胞半抑制浓度为(6.12±1.48)μmol/L；细胞生长曲线显示,冬凌草甲素对THP-1细胞的生长抑制作用呈时间和浓度依赖性。②冬凌草甲素处理24 h后,THP-1细胞出现凋亡,形成凋亡小体,浓度越高细胞凋亡小体形成越多。③0、4、6、8μmol/L 冬凌草甲素(分别设为对照组及4、6、8μmol/L组)处理24 h后,THP-1细胞凋亡率分别为(3.7±1.1)%、(16.2±3.3)%、(30.1±4.3)%、(49.5±6.7)%,对照组与各浓度组凋亡率比较差异均有统计学意义( P<0．05或P<0．01)；与4μmol/L组比较,6、8μmol/L组凋亡率均升高,差异均有统计学意义(P<0．05)。④经Western blot法检测6μmol/L冬凌草甲素处理THP-1细胞24 h后可抑制细胞内Akt/mTOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,并下调Bcl-2、上调Bax的表达。结论冬凌草甲素通过抑制Akt/mTOR、Raf/MEK/ERK信号转导通路的活化,以及调节凋亡调节蛋白Bax和Bcl-2的表达而发挥抗白血病效应。

摘要:

背景:已有研究证明,冬凌草乙素可以通过诱导许多实体肿瘤的细胞凋亡而发挥抗肿瘤作用,目前,冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的作用尚未见资料报道.目的:观察冬凌草乙素对白血病HL-60细胞的体外增殖抑制作用及其机制.方法:以不同浓度的冬凌草乙素(10-50 μmol/L)作用于体外培养的HL-60细胞24,48,72 h,应用MTT法检测细胞生长抑制率,流式细胞术检测细胞周期,免疫印迹法检测Caspase-3及其裂解底物多聚(ADP-核糖)聚合酶(PARP)表达水平的变化,并对细胞周期调节蛋白P21、P16的表达水平进行检测.结果与结论:冬凌草乙素可显著抑制细胞的生长及诱导细胞发生凋亡,呈现出明显的量-效与时-效关系.流式细胞术检测结果表明细胞主要被阻滞在G0/G1期,50 μmol/L的冬凌草乙素作用48 h后可以出现典型的亚G1期峰(细胞凋亡峰).免疫印迹法检测结果显示Mr32 000的Caspse-3酶被活化出现Mr20 000亚单位片段,同时Caspse-3的底物PARP被裂解出现Mr89 000的亚单位片段,免疫印迹法检测结果还显示50 μmol/L的冬凌草乙素作用不同时间后,细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平逐渐升高.结果提示冬凌草乙素在体外对HL-60细胞具有显著的细胞周期阻滞作用,并诱导细胞发生凋亡,通过上调细胞周期调节蛋白P21及P16的表达水平及激活Caspse-3可能是冬凌草乙素引起HL-60细胞G0/G1阻滞及诱导细胞发生凋亡的重要作用机制之一.