摘要:

目的 探讨不同质量浓度磁性c-erbB-2反义探针转染乳腺癌SK-Br-3细胞株后,对其形态及表达的影响.方法将反义探针含铁质量浓度分别定为5、10、25、50、100 mg/L,转染乳腺癌SK-Br-3细胞24 h.采用普鲁士蓝染色并在光学显微镜及透射电镜下直接观察细胞铁颗粒,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,台盼蓝排除实验、CCK-8试剂盒观察细胞活性,Western blot法检测蛋白质表达,磁共振成像研究信号强度的变化.结果 SK-Br-3细胞对反义探针在一定质量浓度范围内(5、10、25 mg/L)呈依赖式摄取.当探针质量浓度为25 mg/L时,细胞内铁含量为(18.38±0.28) pg,细胞活力、存活率及细胞内c-erbB-2蛋白表达量明显降低(P均＜0.05),磁共振扫描图像显示该组细胞T2值出现明显降低(P＜0.05).50及100 mg/L组各项结果与25 mg/L组比较差异无统计学意义(P均＞0.05).结论 当磁性c-erbB-2反义探针质量浓度为25 mg/L时,可有效转染并特异性抑制SK-Br-3细胞株的表达,并被磁共振成像所检测.

摘要:

目的 制备超顺磁性氧化铁(SPIO)标记的反义寡脱氧核苷酸(ASODN)探针,探讨其应用于转染细胞磁共振(MR)成像的可行性.方法 采用化学交联法将SPIO标记于c-erbB2癌基因的ASODN制成ASODN探针,原子力显微镜检测探针形态,高效液相凝胶色谱法检测联接率和生物活性,聚丙烯酰胺凝胶电泳法检测稳定性.将ASODN探针转染高表达c-erbB2癌基因的SK-Br3肿瘤细胞株,普鲁士蓝染色后于光学显微镜下观察细胞内铁分布,原子吸收光谱法测定细胞内铁含量,MR扫描观察细胞信号强度变化情况.结果 制备的ASODN探针近似球形,粒径在25～40 nm间,分散均匀,联接率为100%,仍保持原有生物活性,稳定性好.转染ASODN探针后的SK-Br3细胞胞浆内可见多少不等的蓝色铁颗粒,细胞内铁含量明显高于未转染ASODN探针的其他各组细胞(P均＜0.01);MR扫描显示其信号强 度最弱,信噪比值明显低于其他各组细胞(P均＜0.05).结论 成功制备SPIO标记ASODN探针,该探针能有效进入SK-Br3细胞内,明显降低MR扫描下的转染细胞信号强度.

摘要:

为了研究c-jun调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的作用机制,采用离体仔猪睾丸间质细胞体外孵育法,c-jun ASODNs拮抗c-jun,加用cAMP,通过酶联免疫方法检测睾酮水平来观察c-jun在调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞分泌睾酮的影响.结果是hCG可刺激仔猪睾丸间质细胞的睾酮分泌,c-jun ASODNs(0.125～2 μmol/L)呈剂量依赖性抑制hCG诱导离体睾丸间质细胞的分泌(r=--0.787,P＜0.01).加用cAMP后睾酮分泌增加,可逆转c-jun ASODNs抑制hCG诱导离体睾丸间质细胞的睾酮分泌.结论是c-jun可促进hCG诱导离体仔猪睾酮间质细胞睾酮的分泌,此过程可能以cAMP作为第二信使,进行信息传递.

摘要:

目的:探讨肿瘤坏死因子α(TNFα)反义寡核苷酸(ASODN)对大鼠肝脏缺血再灌注损伤的保护作用.方法:雄性SD大鼠160只,分为正常对照组、缺血再灌注组、TNFα错配ODN组和TNFα反义ODN组,观察了肝脏缺血60分钟及再灌注1、3、6及12小时后,检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT)、丙二醛(MDA)及肝组织病理学变化.结果:缺血再灌注组和TNFα错配ODN组肝脏缺血再灌注后,肝脏瘀血明显,血浆ALT和MDA含理均显著增高;肝脏缺血再灌注用TNFα反义ODN处理后,血浆ALT和MDA含量明显降低,肝组织瘀血减轻.结论:TNFα反义ODN可以抑制大鼠肝脏缺血再灌注所致的炎症反应,对大鼠肝脏缺血再灌注损伤有保护作用.

摘要:

目的:探讨磁性c-erbB2反义寡脱氧核苷酸探针对SK-Br-3肿瘤细胞株形态及表达的影响,阐明该探针是否同时具有诊断与治疗功能.方法:磁性c-erbB2反义探针转染高表达c-erbB2的SK Br 3肿瘤细胞作为实验组,磁性c-erbB2反义探针转染Fuda肿瘤细胞株、SPIO及ASODN转染SK-Br-3肿瘤细胞、未转染的SK-Br-3肿瘤细胞设置为4个对照组,普鲁士蓝染色光镜观察细胞内铁的分布,透射电镜观察其超微结构,并检测细胞cerbB2蛋白表达变化及铁含量,行体外MR成像.结果:光镜显示SK-Br-3肿瘤细胞胞浆内散在分布铁颗粒,透射电镜观察到SK-Br-3肿瘤细胞胞浆内铁颗粒、团状吞饮体,细胞出现胞膜空泡化、细胞固缩、核固缩及凋亡小体,而对照组细胞无上述改变；与对照组比较,实验组SK-Br3细胞蛋白的表达抑制率明显升高,细胞铁含量增加(P＜0.01),MR扫描显示信号减低(P＜0.05).结论:磁性c-erbB2反义探针能够顺利进入SK-Br-3肿瘤细胞,不仅能导致SK-Br-3细胞的凋亡,还能够被体外MR成像所检测,可能成为一种具有治疗与诊断意义的双功能探针.

摘要:

目的研究转染反义寡脱氧核苷酸(antisense oligodeoxynucleotides, ASODN)对Cdk7特异性的沉默作用及其对体外培养人肝细胞癌HepG2细胞pRb和Cdk2磷酸化水平以及细胞周期进展的影响,确定Cdk7作为抗肿瘤药物研发靶点的可行性.方法以免疫印迹检测转染ASODN对Cdk7 的特异性沉默作用及其对pRb和Cdk2磷酸化水平的影响;以流式细胞术测定转染ASODN后细胞DNA含量,确定细胞周期进展和凋亡情况,透射电子显微镜观察细胞凋亡形态.结果转染ASODN 72 h后,Cdk7蛋白水平显著下降,有明显剂量-效应关系,最高可降至对照组的0.12±0.05;在ASODN浓度>100 nmol.L-1时,pRb和Cdk2磷酸化水平显著下降,两种蛋白的磷酸化水平与给药剂量有明显依赖关系.随转染ASODN浓度上升及转染时间的延长,G0/G1期细胞、凋亡细胞比例迅速升高,与对照组比较,出现明显的G0/G1期阻滞(P<0.01)和细胞程序性死亡(P<0.01) ;透射电子显微镜观察显示>50 nmol·L-1各组细胞具特征性凋亡形态.结论用ASODN沉默Cdk7可降低pRb以及Cdk2的磷酸化水平,使其生物活性下降,对体外培养HepG2细胞可产生显著的G0/G1期阻滞,引起细胞周期延长和细胞凋亡,产生抗增殖作用,可以Cdk7作为抗肿瘤药物研发的新靶点.

摘要:

为了研究c-jun调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞睾酮分泌的作用机制,采用离体仔猪睾丸间质细胞体外孵育法,c-jun ASODNs拮抗c-jun,加用cAMP,通过酶联免疫方法检测睾酮水平来观察c-jun在调节hCG诱导仔猪睾丸间质细胞分泌睾酮的影响.结果是hCG可刺激仔猪睾丸间质细胞的睾酮分泌,c-jun ASODNs(0.125～2 μmol/L)呈剂量依赖性抑制hCG诱导离体睾丸间质细胞的分泌(r=--0.787,P＜0.01).加用cAMP后睾酮分泌增加,可逆转c-jun ASODNs抑制hCG诱导离体睾丸间质细胞的睾酮分泌.结论是c-jun可促进hCG诱导离体仔猪睾酮间质细胞睾酮的分泌,此过程可能以cAMP作为第二信使,进行信息传递.

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目的探讨反义bcl-2寡脱氧核苷酸(oligodeoxynucleotide,ODN)对BcaCD885细胞凋亡的影响.方法以脂质体Lepofection为载体,一过性转染20μmot/L反义及正义bcl-2 ODN于BcaCD885细胞后,通过细胞形态观察及流式细胞术(FCM)分析,从形态学及细胞学水平对凋亡细胞进行检测.结果 20μmo1/L反义bcl-2 ODN转染组,细胞出现了凋亡形态学改变,FCM检测凋亡率与对照组间存在显著差异(P＜0.05).而20μmol/L正义bcl-2ODN转染组与对照组相似,在形态学上未见明显的凋亡细胞出现,FCM检测两者凋亡率不存在显著差异(P＜0.05).结论反义bcl-2 ODN能促进BcaCD885细胞凋亡.

摘要:

对反义核酸的概念、作用机制及反义核酸类药物必需符合的条件等有关分子生物学研究进展进行了综述.介绍了几种人工合成的反义核酸及其应用前景,并就研究中需要解决的问题做了探讨.

摘要:

目的:研究组织因子(TF)反义寡脱氧核苷酸(AS/TF)对大鼠心肌缺血再灌注损伤的作用.方法:设计针对大鼠TF的AS/TF、正义寡脱氧核苷酸(S/TF)和错配寡脱氧核苷酸(Sc/TF).50只雄性Wistar大鼠随机分为假手术组(Sham组)、缺血再灌注损伤组(I/R组)、反义寡脱氧核苷酸防治组(AS/TF组)、正义寡脱氧核苷酸防治组(S/TF组)和错配寡脱氧核苷酸防治组(Sc/TF组),每组10只.Shm组和I/R组大鼠经静脉注入生理盐水,AS/TF组、S/TF组和Sc/TF组大鼠分别注入AS/TF、S/TF和Sc/TF.于注射后10 h麻醉大鼠,开胸暴露心脏,于冠状动脉左前降支中1/2处穿线,Sham组只穿线不结扎,其余4组均结扎造成心肌缺血,90min后解除结扎,再灌注1 h.用ELISA检测大鼠血清心肌肌钙蛋白I(cTnI)、血浆凝血酶-抗凝血酶复合物(TAT)和血小板P-选择素的含量.Northern印迹杂交检测大鼠缺血区心肌组织中TF基因的转录,HE染色观察缺血区心肌组织的病理变化.结果:大鼠心肌缺血再灌注后,血清cTnI、血浆TAT和P-选择素含量明显上升(P＜0.001),AS/TF组的上升幅度低于I/R组、S/TF组和Sc/TF组(P＜0.05).Northern印迹杂交显示大鼠缺血区心肌组织TF基因的转录明显增强,AS/TF组TF mRNA的转录弱于I/R组、S/TF组和Sc/TF组.HE染色可见大鼠缺血区心肌组织有灶性坏死、心肌纤维溶解和炎性细胞浸润.AS/TF组大鼠心肌的坏死程度轻于I/R组、S/TF组和Sc/TF组.结论:大鼠心肌缺血再灌注过程中,TF基因的转录和表达增强,针对TF的AS/TF能够特异地抑制TF基因的转录和蛋白表达,减少TF的合成与释放,从而抑制凝血系统的激活,减轻心肌组织的损伤和坏死.