摘要:

本发明提供一种植物来源活性成分—纳米级膜性囊泡的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：（1）植物原料原液的提取；（2）?上清液或浓缩液的提取；（3）膜性囊泡的沉淀和重悬；（4）纳米级均质处理，获得纳米级颗粒，即植物来源活性成分纳米级膜性囊泡。本发明还提供一种植物来源活性成分—不同密度纳米粒子的制备方法。本发明采用植物原料制备纳米级膜性囊泡，具有原料来源丰富，成本低，可大量生产等优点，使规模化利用膜性囊泡成为现实。

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本发明提供一种葡萄来源活性成分—纳米级膜性囊泡的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：（1）葡萄原液的提取；（2）过滤；（3）上清液的提取；（4）纳米级均质处理。本发明还提供一种葡萄来源活性成分—纳米级膜性囊泡的用途，所述葡萄来源活性成分纳米级膜性囊泡应用于炎症性肠病的治疗。本发明采用葡萄原料制备膜性囊泡，具有原料来源丰富，成本低，可大量生产等优点，使规模化利用膜性囊泡成为现实。本发明制备的膜性囊泡能激活肠道干细胞，是胃肠道疾病的有效治疗药物。

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本发明公开了一种CSN8shRNA纳米脂质体（nano-liposome）的制备方法及其在治疗炎症性肠病的应用，通过向磷酸卵磷脂和胆固醇混合物中加入CSN8shRNA质粒缓冲液后进行超声水浴、过滤、分离、富集等工艺即可制得，制备方法步骤简单；制得的CSN8shRNA纳米脂质体能进入肠道黏膜，有效抑制肠道细胞CSN8的表达，缓解肠炎症状，治疗效果显著。

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目的:制备鼠抗人PD-1单克隆抗体并对其生物学特性进行鉴定.方法:以稳定表达人PD-1分子的基因转染细胞株L929/PD-1免疫BALB/c小鼠,采用流式细胞术筛选分泌鼠抗人PD-1单抗的杂交瘤细胞株.用IgG亚型快速定性试纸法、肿瘤细胞株表面PD-1分子识别谱检测、抗体效价测定、竞争结合抑制实验和蛋白质印迹等方法对所获PD-1单抗的生物学特性进行分析鉴定.结果:获得1株持续稳定分泌PD-1单抗的杂交瘤细胞株,命名为6E1.单抗6E1的重链为IgG1、轻链为κ.单抗6E1对肿瘤细胞株U937、Thp-1、Jurkat细胞表面PD-1分子的识别谱与商品化PD-1单抗MIH4一致.单抗6E1与商品化抗体MIH4具有相似的识别位点.蛋白质印迹检测结果表明单抗6E1可特异性识别PD-1分子.结论:成功获得了1株鼠抗人PD-1单克隆抗体.

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本发明提供一种葡萄来源活性成分—纳米级膜性囊泡的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：（1）葡萄原液的提取；（2）过滤；（3）上清液的提取；（4）纳米级均质处理。本发明还提供一种葡萄来源活性成分—纳米级膜性囊泡的用途，所述葡萄来源活性成分纳米级膜性囊泡应用于炎症性肠病的治疗。本发明采用葡萄原料制备膜性囊泡，具有原料来源丰富，成本低，可大量生产等优点，使规模化利用膜性囊泡成为现实。本发明制备的膜性囊泡能激活肠道干细胞，是胃肠道疾病的有效治疗药物。

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本发明的CD3^-CD56⁺NK细胞高效扩增培养系统的构建方法，主要是提供一种由Poly-D-Lysine或Poly-L-Lysine作为黏附剂，黏附anti-CD137 mAb和IL-15构成的体外大量扩增CD3^-CD56⁺NK细胞的培养系统，与现有的用其它方法相比，明显具有：方法简单合理，易于推广，所需原材料少，成本低，制备周期较短，扩增效率高和对肿瘤细胞的杀伤效率高等优点。实验证明，采用本发明的方法扩增的CD3^-CD56⁺NK细胞与用其他已知的细胞因子或细胞因子组合扩增的CD3^-CD56⁺NK细胞相比，在相同的细胞浓度下，对A549的杀伤能力提高一倍以上。

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本发明涉及一种用于定向输送Rspo1来修复放射性肠上皮损伤的间充质干细胞，其在建立的辐射性肠上皮损伤小鼠模型基础上，成功构建了pEGZ-Term/Rspo1逆转录病毒表达载体，利用基因转染的方法获得了稳定表达Rspo1的基因转染细胞株C3H10/Rspo1，经初步鉴定其分泌的Rspo1蛋白具有生物学活性，然后进一步利用Rspo1和间充质干细胞靶向作用于肠道干细胞救治肠上皮损伤特性，以C3H10/Rspo1细胞株过继输注肠上皮辐射损伤小鼠，能有效促进肠上皮辐射损伤的修复。

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目的：观察结肠癌患者血浆外泌体（ exosomes ）表面膜结合型转化生长因子β1（ mTGF-β1）表达，探讨其生物学作用。方法选取结肠癌患者20例（观察组），同期体检健康者10例（对照组），提取两组血浆exosomes，采用流式细胞仪分析exosomes 表面mTGF-β1表达。从结肠癌患者肝素抗凝全血中分离外周血单个核细胞（ PB-MCs），分选获得纯化的CD4＋T细胞，采用CD3、CD28诱导细胞增殖，将细胞随机分为三组，A组加入TGF-β1阻断性单抗处理的结肠癌患者血浆exosomes（1μg／mL），B组加入IgG1同型对照抗体处理的结肠癌患者血浆exosomes （1μg／mL），C组加入健康人血浆exosomes（1μg／mL），培养3天时进行台盼蓝染色计数活细胞数；采用ELISA法检测细胞培养上清液中TNF-α和IFN-γ水平。结果观察组血浆exosomes表面mTGF-β1表达阳性率为36．52％±4．26％，高于对照组的9．23％±3．77％（P＜0．01）。与C组比较，B组CD4＋T细胞数量及其分泌的TNF-α、IFN-γ水平均降低（P均＜0．05）；与B 组比较，A组CD4＋T细胞数量及其分泌的TNF-α、IFN-γ水平均增加（P均＜0．05）。结论结肠癌患者血浆exosomes表面高表达mTGF-β1，mTGF-β1表达增加可能是构成结肠癌免疫抑制环境的重要因素，可促进结肠癌的发生、发展。

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本发明提供一种纳米脂质微泡的制备方法，包括葡萄汁液的提取、过滤、浓缩液的提取、纳米脂质微泡的纯化、纳米脂质微泡的保存。本发明制备的纳米脂质微泡具有结构稳定的优点，并具有特殊的功能，单独或配伍或作为添加成分用于保护肠道及肝脏药品及保健品的制造。本发明制备方法采用过滤方法，不使用价格高昂的离心设备，成本大大降低，制备步骤简单，产出量大幅增加，便于实现工业化生产，同时使纳米脂质微泡能够真正投入应用。xa0xa0

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本发明提供一种植物来源活性成分—纳米级膜性囊泡的制备方法，所述制备方法包括以下步骤：（1）植物原料原液的提取；（2）上清液或浓缩液的提取；（3）膜性囊泡的沉淀和重悬；（4）纳米级均质处理，获得纳米级颗粒，即植物来源活性成分纳米级膜性囊泡。本发明还提供一种植物来源活性成分—不同密度纳米粒子的制备方法。本发明采用植物原料制备纳米级膜性囊泡，具有原料来源丰富，成本低，可大量生产等优点，使规模化利用膜性囊泡成为现实。