摘要:

目的:运用中药血清药理学方法,观察益骨胶囊含药血清对新生大鼠颅骨成骨细胞(OB)体外增殖的影响,并探讨用于OB药效观察的益骨胶囊含药血清制备条件.方法:雌性12月龄SD大鼠80只,随机分为生理盐水组、益骨胶囊低剂量(11.6 g/kg)、中剂量(34.8 g/kg)、高剂量(104.4 g/kg)组,每日灌胃一次,连续12天,分别在灌胃后的0.5 h、1 h、1.5 h、2 h采血,分离血清,用含不同浓度益骨胶囊的血清培养SD新生大鼠颅骨OB,MTT法检测细胞增殖情况.结果:末次灌胃后1.5 h采血组的吸收度(A)值明显高于各组其它时间(P＜0.05);不同剂量各浓度的益骨胶囊含药血清对体外培养的OB增殖均有显著的促进作用,其中以高剂量组的稀释比为25%的血清浓度最佳.结论:益骨胶囊含药血清对OB增殖具有明显的促进作用;益骨胶囊用于OB药效观察的大鼠含药血清制备条件以人等效剂量9倍连续12天灌胃、末次灌胃后1.5 h采血,血清添加浓度以25%为宜.

摘要:

目的 通过观察不同浓度瘦素对离体培养乳鼠颅骨成骨细胞的作用,探讨瘦素(Leptin )对成骨细胞增殖以及成骨细胞上血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)表达的影响,为促进骨愈合过程中骨修复、再生的临床治疗提供一定的理论依据.方法 取新生24h乳鼠颅盖骨,经酶解消化后得到原代成骨细胞,进行体外培养并鉴定.采用MTT法(噻唑蓝染色法)测定各组的OD值,观察瘦素对成骨细胞增殖能力的影响;采用RT-PCR法测定瘦素作用成骨细胞后VEGF Mrna的表达情况.结果 经细胞鉴定后证实其系成骨细胞;经MTT法检测表明,瘦素作用24h后,各实验组OD值随瘦素浓度升高而增加;经RT-PCR法检测表明,VEGF Mrna可在乳鼠成骨细胞内稳定表达;半定量分析表明,不同瘦素剂量组间VEGF Mrna的表达量呈现一定规律,随着瘦素浓度的升高,VEGF Mrna的表达量逐渐增加.结论 瘦素可促进成骨细胞增值;VEGF Mrna在成骨细胞内稳定表达;瘦素可上调成骨细胞上VEGF Mrna的表达,并存在一定的剂量依赖关系.

摘要:

目的：改进聚磷酸钙的力学特性和生物活性，为临床骨修复提供新材料。方法制备掺锶聚磷酸钙骨修复材料，采用万能材料试验机测试抗压强度，并采用噻唑蓝（MTT）比色法考察其对成骨细胞增殖的影响。结果掺锶聚磷酸钙多孔支架的抗压强度为（212.4±5.3）MPa，明显大于聚磷酸钙多孔支架的（172.5±8.3）MPa（ P<0.05）；掺锶聚磷酸钙多孔支架降解0，7，14，21 d时的抗压强度均大于聚磷酸钙多孔支架，差异均有统计学意义（ t=8.907，8.222，8.302，7.445，P<0.05）。MTT比色法结果表明，培养3，4，5 d后，掺锶聚磷酸钙、聚磷酸钙作用的成骨细胞的吸光度（ A）值高于阴性对照，差异均有统计学意义（ t=2.559，6.000，4.533，2.546，3.574，2.932，P<0.05）；培养4，5 d后，掺锶聚磷酸钙作用的成骨细胞的 A值高于聚磷酸钙，差异均有统计学意义（ t=2.733，2.038，P<0.05）。结论新型骨修复材料掺锶聚磷酸钙具有良好的抗压特性，并能促进成骨细胞的增殖，具有良好的临床应用前景。

摘要:

背景:临床应用锂治疗造血系统疾病和双极性疾病已经有数十年,并且发现锂可以直接刺激骨髓间充质干细胞的增殖.目的:研究雌激素受体抑制下氯化锂对大鼠成骨细胞增殖分化及自噬的影响.方法:实验选取10只出生72 h的SPF级SD乳鼠(由黑龙江中医药大学提供).采用酶消化法和茜素红染色法获得和鉴定成骨细胞.取对数生长期成骨细胞,于培养基中加入不同浓度的氯化锂(0,1,2,5 nmol/L)处理24 h,采用CCK-8法检测各组细胞增殖情况.另取成骨细胞随机分为空白组(正常培养细胞)、抑制剂组(10-7 mol/L ICI 182780)、治疗组(5 nmol/L氯化锂+10-7 mol/L ICI182780).采用钙化结节染色及碱性磷酸酶活性检测各组成骨细胞分化情况;Western blot法测定各组成骨细胞中Beclin1和Runx2蛋白表达情况.结果与结论:①倒置显微镜下观察细胞多为单核、多边形及梭形,局部有细胞密集的细胞团;②CCK-8法检测结果显示不同浓度的氯化锂都能对成骨细胞增殖产生促进作用,呈浓度依赖性;③茜素红染色结果显示与空白组比较,抑制剂组成骨细胞矿化能力明显降低,与抑制剂组比较,治疗组成骨细胞矿化结节能力明显增加(P＜0.05);活性测定结果显示与空白组比较,抑制剂组中碱性磷酸酶活性明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中碱性磷酸酶活性明显增加(P＜0.05);④Westem blot结果显示与空白组比较,抑制剂组中Beclin1和Runx2蛋白表达明显降低,与抑制剂组比较,治疗组中Beclin1和Runx2蛋白表达显著增加(P＜0.05);⑤结果提示,雌激素受体抑制下氯化锂可以提高大鼠成骨细胞增殖分化及自噬.

摘要:

目的：探讨 rhPTH1～84、rhPTH37～84及 hPTH1～34对大鼠成骨细胞增殖的影响。方法分子生物学方法克隆表达 hPTH1～84、hPTH37～84重组蛋白。体外培养的大鼠成骨细胞给予不同浓度的 PTH 作用后，采用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖。结果获得了浓度约为261．82 mg／L 的 rhPTH1～84和浓度为165．45 mg／L 的rhPTH37～84。10－10～10－7 mol／L 范围的 rhPTH1～84和 hPTH1～34促进大鼠成骨细胞的增殖；rhPTH37～84则抑制大鼠成骨细胞增殖。结论成功获得了高浓度高纯度的 rhPTH1～84及 rhPTH37～84。rhPTH37～84抑制细胞增殖，为进一步研究甲状旁腺激素及其羧基端肽段的功能奠定了基础。

摘要:

背景：接骨七厘片是促进骨折愈合、临床疗效较好的复方中药，但其作用机制尚不十分清楚。目的：观察接骨七厘片药物溶液对成骨细胞增殖和钙盐沉积能力的影响。方法：以体外培养的MC3T3-E1成骨细胞为研究对象。①常规培养24 h更换无血清DMEM培养液，饥饿培养24 h同步化细胞周期，弃去培养液，实验组每孔加入100μL含接骨七里片药物溶液的DMEM完全培养基，对照组加入DMEM完全培养基，于培养24 h和48 h使用MTS一步法检测细胞增殖活力。②以1×105密度接种MC3T3-E1细胞于96孔板，培养4 h更换成骨诱导培养液，诱导21 d进行茜素红染色观察MC3T3-E1细胞的钙盐沉积能力，对照组细胞不进行成骨诱导。结果与结论：在培养24 h和48 h，接骨七厘片药物实验组细胞增殖程度均较对照组上调(P <0.05)；成骨诱导21 d后，茜素红染色发现接骨七厘片药物实验组钙盐结节生成明显多于对照组(P<0.01)。以上结果表明接骨七厘片药物溶液能够明显促进成骨细胞增殖和钙盐沉积能力。